毛利小五郎的徒弟
做完pcr后,跑胶完发现空白对照有一条不清晰的暗带,与其他条带相比暗许多,但是确实有条带,这算是被污染了吗,需要重新做吗?
dxyc42u
1) 引物设计不合理。
扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列。
(2) 看胶图:空白对照条带的大小是否与目的条带一样,空白对照条带的亮度是否与目的条带一样。
若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染。更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。空白对照条带的亮度比目的条带弱:可通过降低循环数使实验组目的条带扩出,而空白对照扩不出目的条带。
huarenqiang5
这种情况考虑是污染了,建议重新做。
sswei
空白的有暗条带,说明被污染了。
loveliufudan
如果在PCR跑胶的空白对照中出现了一条不清晰的暗带,与其他条带相比明显暗许多,这可能是由于污染引起的。虽然暗带表示存在DNA或污染物,但暗带的程度可能很低,不会对实验结果产生明显影响。
在这种情况下,可以考虑以下措施:
1. 重复实验:如果其他PCR反应样品中没有明显的暗带,并且重要的目标条带是清晰可见的,那么您可以继续分析其他样品而无需重新做整个实验。确保在下一次实验中进行严格的无菌操作,以减少污染的可能性。
2. 检查实验条件:回顾实验操作过程,确保每个步骤中使用的试剂和器材都是干净的,并且实验操作符合无菌操作的要求。确保所有反应管和工作台面都经过充分的清洁和消毒。
3. 考虑排除污染源:检查可能的污染源,例如PCR试剂、引物、模板DNA、水、实验室环境等。确保这些材料都没有受到污染,并按照最佳实验室实践操作。
如果暗带的存在对实验结果产生明显的干扰,或者您怀疑实验结果的准确性受到了影响,那么可能需要重新进行PCR实验。在重新实验时,要仔细检查和优化实验条件,以确保避免污染和获得可靠的结果。