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基因组DNA做PCR时,最下面很亮的带是什么啊

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毛利小五郎的徒弟

基因组DNA做PCR时,最下面很亮的带是什么啊

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7 个回答

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bio_qin

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最下面的带,说明片段长度小,一般都是引物二聚体。若不想出现引物二聚体,建议重新设计引物进行PCR扩增。

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李振阳遗传

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你如果是基因组dna的话考虑一下是否断裂

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dxyc42u

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考虑非特异性扩增,解决办法:1.重新设计引物或者2.使用巢式PCR适当降低模板或引物浓度。3、适当减少酶。 4、降低镁离子浓度 5、适当提高退火温度或使用二阶段温度法

6、减少循环次数

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xiaojie17

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一般是引物二聚体,引物之间结合了

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huarenqiang5

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不是引物二聚体就是RNA,RNA没有处理干净,建议你加DMSO跑,提高退火温度 可以排除二聚体和RNA的可能。

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sswei

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最下面很亮的带不是引物二聚体就是RNA。

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loveliufudan

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当在基因组DNA的PCR反应中出现最下面非常亮的条带时,通常表示的是非特异性扩增产物或者PCR反应的副产物。

非特异性扩增产物是指PCR反应中产生的与目标DNA不完全匹配的附加产物。这些附加产物可能是由于引物的非特异性结合,模板DNA的异质性或PCR条件不理想等因素引起的。这些产物通常比目标片段较短或较长,因此在凝胶上呈现为非常亮的带。

除非特异性扩增产物外,还可能存在其他PCR反应的副产物,如引物二聚体、引物降解产物等。这些副产物可能在PCR反应中生成,并在凝胶电泳中以亮带的形式出现。

为了准确确定产物的来源,建议进行以下步骤:

1. 重新评估引物设计:检查所使用的引物序列,确保引物的特异性和合适的匹配度。可以使用引物设计工具进行验证。

2. 优化PCR反应条件:尝试优化PCR反应条件,包括引物浓度、扩增温度和扩增循环数等。适当的优化可以提高特异性扩增并减少副产物的生成。

3. 检查DNA模板质量:确保所使用的基因组DNA质量良好,没有降解或污染。可以使用质粒提取试剂盒或基因组DNA提取试剂盒等标准方法提取高质量的DNA。

4. 实验控制:包括阴性对照和阳性对照样品来确定是否存在非特异性扩增或副产物的问题。

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