芹菜雨
汤姆卜丽波
一般细胞密度长到大概70-80%就可以了
毛利小五郎的徒弟
感染条件:转染的时候细胞密度尽量别到100%不是因为转染效率,而是因为在转染之后的12-24小时,细胞仍然可以复制的,如果密度太大了,细胞容易拥挤导致漂浮。
loveliufudan
进行293T细胞的慢病毒感染时,以下是一般推荐的条件:
1. 细胞密度和培养状态:在感染前,确保293T细胞处于活跃的生长状态,并且细胞密度适中。通常,细胞密度应在80%至90%的对数生长期。
2. 培养基选择:使用适当的培养基来维持293T细胞的生长和感染。常见的培养基包括DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)或MEM(Minimum Essential Medium),其中含有高浓度的FBS(胎牛血清)或FCS(胎牛胎血清)。
3. 细胞处理和传代:在进行慢病毒感染之前,确保细胞处于较低的传代数,以减少细胞老化和不稳定性的影响。推荐每3至4天进行一次细胞传代。
4. 慢病毒载体:准备带有所需基因或RNAi的慢病毒载体,如pLenti系列载体。确保载体质粒中含有所需的启动子、转录调控元件和选择标记。
5. 转染试剂:选择适合的转染试剂和方法进行慢病毒载体的转染。常见的转染试剂包括聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine,PEI)或类似的转染试剂。
6. 感染时间和病毒浓度:根据慢病毒载体和感兴趣的基因或RNAi的要求,确定合适的感染时间和病毒浓度。感染时间通常在24至48小时之间,并可以根据实验需要进行优化。
7. 病毒扩增和收集:在感染期结束后,可收集病毒上清液进行病毒扩增。通过离心和滤过等方法,获得高浓度的慢病毒颗粒用于后续的细胞感染。