细胞培养过程中有支原体污染怎么办？

支原体污染细胞后，有必要清除支原体，常用方法有：

1）对于非重要、易培养的细胞，将培养物与用过的培养基灭活后丢弃即可。对于较为重要的细胞，如来源珍贵或保藏量较小等可以采用以下（2）-（8）的方法。

2）用 MRA 处理：用支原体清除剂（Mycoplasma Removal Agent）处理细胞，1-2 周可以清除支原体。

3）用清洗纯化法清除支原体污染的方法：细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清洗→反复离心洗涤，其原理是利用离心力、细胞、微生物质量和悬液的浮力差达到清除支原体的目的。

如结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。

4）药物辅助加温处理：先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在 41℃ 培养 18 小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。

5）免疫反应清除法：主要包括有动物体内接种除菌法和体外吞噬细胞吞噬法，前者是把受污染的细胞接种在动物皮下或腹腔中，借动物免疫系统消灭支原体，而细胞却能在体内继续生长，待一定时间后，从体内取出细胞再进行培养繁殖；

而后者从动物腹腔采取巨噬细胞并对其进行纯化，加入被污染的细胞培养液进行混合培养。在培养过程中，为检查支原体是否已被消除干净，可取出混合物进行染色或镜检等来判断支原体是否被消除干净。

支原体预防

提前做好支原体预防工作是降低感染几率的最好方法。针对支原体污染的预防，要注意周围环境的清洁，避免支原体污染，可采用一些对支原体有效的喷雾剂和湿巾进行清洁。细胞培养箱也可使用专门的支原体祛除剂，否则温度合适后，培养箱的用水中可容易滋生微生物和支原体。

少量支原体污染可以先不处理观察看看，或者添加抗生素，大量的就需要彻底消毒

必须要清除支原体 1）对于非重要、易培养的细胞，将培养物与用过的培养基灭活后丢弃即可。对于较为重要的细胞，如来源珍贵或保藏量较小等可以采用以下（2）-（8）的方法。2）用 MRA 处理：用支原体清除（Mycoplasma Removal Agent）处理细胞，1-2 周可以清除支原体。

如果在细胞培养过程中发现支原体污染，以下是应对支原体污染的常见措施：

1. 隔离污染源：立即将受到污染的细胞系或细胞培养物与其他细胞隔离开，以防止污染的扩散。

2. 停止使用受污染的培养器具和试剂：停止使用可能存在支原体污染的培养器具、培养基、培养液等。确保使用无菌、经过验证的试剂和器具。

3. 检测支原体：进行支原体的检测，可以使用PCR、ELISA或其他相关的检测方法。这将帮助确认支原体的存在和污染程度。

4. 清除污染：根据支原体的检测结果和实验室安全操作规范，采取适当的措施清除污染。这可能包括使用抗生素、抗病毒药物或其他适当的方法来杀灭或去除支原体。

5. 细胞系处理：根据支原体的类型和感染程度，可以选择处理细胞系，例如使用抗生素处理或者重新建立无污染的细胞系。

6. 检查其他细胞系和培养物：进行其他细胞系和培养物的检测，以确认是否存在其他受污染的细胞系或培养物。

7. 实验室清洁和预防措施：清洁实验室设备、培养箱、工作台等，以防止支原体的再次污染。同时，严格遵守无菌操作规范和实验室的生物安全操作指南，以预防细胞污染和支原体传播。