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thp1建立稳转细胞系,是在悬浮状态下感染还是在PMA诱导贴壁后感染病毒再筛选?

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芒果遇上梨

帖子上有人说,悬浮thp1细胞不好感染,最后用pma诱导贴壁后再感染病毒,可以提高感染效率。但是pma诱导贴壁后,thp1就不能传代增殖了,那感染病毒后,还怎么筛选,怎么建立稳系呢,建立稳系肯定需要传代,增殖的?而且嘌呤霉素筛选的时候还需要一直加PMA维持thp1细胞的贴壁状态吗?

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6 个回答

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nbszd

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想知道你们PMA的浓度一般用多少

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是TTT

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PMA诱导贴壁后再感染筛选,筛选完成以后再去除PMA

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z流沙z

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THP-1诱导为巨噬细胞后,不能继续传代增殖,所以如果需要构建稳转细胞系,最好不要诱导直接用病毒感染后再分单细胞

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huarenqiang5

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建议在PMA诱导贴壁后感染病毒再进行筛选。

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土井挞克树

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我们一般都是在PMA诱导贴壁后感染病毒再筛选。

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loveliufudan

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PMA(Phorbol 12-Myristate 13-Acetate)是一种诱导THP-1细胞向单核巨噬细胞分化的试剂。通过PMA的作用,THP-1细胞会粘附在培养皿的表面上,并表现出巨噬细胞的特征,如吞噬能力等。但是,PMA的作用不是永久的,而是可逆的。一旦去除PMA,THP-1细胞就会恢复悬浮状态,继续增殖和传代。所以您可以用PMA诱导贴壁,然后感染病毒进行筛选,最后将稳定的细胞系分离出来进行传代和扩增。在筛选嘌呤霉素耐受性的时候,您需要继续加入PMA以维持细胞的贴壁状态,这样才能有效地筛选出耐受嘌呤霉素的细胞。

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