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a549,用100%甲醇固定细胞,但是一加进去甲醇,侵袭过膜的细胞就大片白色絮状物脱落到下室中,可是之前也用甲醇固定,没有出现这种情况,现在我怀疑是甲醇的浓度过高或者固定前未用pbs清洗细胞,能否用无水乙醇或者70%的乙醇固定细胞呢?附上下室情况,恳请各位答疑,非常感谢!
毛利小五郎的徒弟
你得问题是甲醇浓度过高以及时间过长,可以降低甲醇浓度,或者可以用70%的乙醇固定,乙醇固定的浓度和时间调节相对简单,成功率高。
loveliufudan
细胞出现大片白色絮状物脱落的情况,可能是甲醇的浓度过高导致的。甲醇的脱水作用可能会导致细胞膜破裂和细胞质的沉淀,进而导致细胞出现结构的改变和损伤。在使用甲醇进行细胞固定前,最好先用PBS缓冲液清洗细胞,这有助于减少细胞膜的破裂和细胞结构的改变。
您可以考虑使用无水乙醇或者70%乙醇进行细胞固定。无水乙醇和70%乙醇的脱水作用相对较小,不会像甲醇一样导致细胞的结构损伤。在使用乙醇固定细胞前,同样建议使用PBS缓冲液进行清洗。
另外,从下室的情况看,可能需要注意下室的卫生情况,以防止可能存在的污染对实验结果的影响。
balalaLy
可以试一下用4%的多聚甲醛固定
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