巴啦啦能量-wy
土井挞克树
首先让细胞长满以后,接触抑制2天(是细胞退出生长周期),加入含有IBMX(一般使用浓度0.5mmol/L),DEX(地塞米松,一般使用浓度是 1umol/L)和insulin(胰岛素,一般使用浓度1-10ug/ml)的培基2天,再换成只含胰岛素的培基2天,然后每两天换液(普通培基)。这 是分化的步骤,但是最关键的是细胞的传代次数,细胞传代次数较多,分化率很低。一般说不能超过20代,最好在10代以内。诱导分化中,细胞的传代数和状态是最重要的。
待细胞长满至80-90%,融合2天(融合的意思是指让细胞接触抑制,就是长满后换液让其再长两天)后,加含终浓度为0.5mmol/L IBMX(储存液浓度0.5mmol/L)、终浓度为1umol/L(储存液浓度为1mg/ml(2.5mmol/L))DEX和终浓度为10ug/ml的胰岛素的10%小牛血清高糖DMEM培养48h;(诱导剂临用时再加到培液中混匀)
48h后换含终浓度为10ug/ml的胰岛素的10%小牛血清高糖DMEM培养液再培养48h,48h后再换10%小牛血清高糖DMEM继续培养,2天后换培养液一次,诱导分化8~12天3T3-L1细胞90%多呈成熟脂肪细胞表型,可用于实验。
huarenqiang5
一般建议加入含有IBMX(使用浓度为0.5mM)、地塞米松(使用浓度为1μmol/L)、胰岛素(使用浓度为1-10μg/mL)的培养液培养2天;
loveliufudan
在脂肪细胞的诱导分化过程中,IBMX和地塞米松的浓度确实可以进行调整。然而,这些调整需要根据实验条件和特定细胞系进行优化。在许多实验中,常用的浓度是0.5 mM的IBMX和1 μM的地塞米松,但这并不意味着在所有条件下都适用这个浓度。
关于诱导分化效果较好、分化速度适中的配方,以下是一个通用的3T3-L1前脂肪细胞分化配方:
为细胞培养基添加如下诱导因子:
0.5 mM IBMX(异丁基甲磺酰胺)
1 μM 地塞米松
10 μg/ml 胰岛素
10% FBS(胎牛血清)
将细胞在37°C和5% CO2条件下培养。
48小时后,去除IBMX和地塞米松,将培养基更换为含有10 μg/ml胰岛素和10% FBS的培养基。然后继续培养。
每隔2天更换培养基,直到细胞完全分化。
这个方案可以作为起始点进行实验。如有需要,可以对浓度进行适当调整,找到适合您实验条件和细胞系的最佳浓度。