脓毒血症细胞模型怎么建立

动物适应性饲养1周,实验前禁食12h。按50mg/kg体重的剂量经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后,将动物仰卧固定于手术板上,腹部手术区常规消毒与去毛,无菌条件下用手术刀在腹壁作一长约2cm切口,经切口进腹在回盲瓣远端分离并以3号丝线结扎盲肠,用18号注射针头于结扎端穿孔2次,并挤出粪便少许,然后用4号丝线间断缝合腹膜及皮肤,同时立即皮下注射生理盐水50ml/kg体重抗休克。

在建立脓毒血症细胞模型时，可以采用以下步骤：

1.选择细胞系：选择适合研究脓毒症的细胞系，例如单核细胞系（如THP-1、U937）、树突状细胞系（如DC2.4）或淋巴细胞系（如Jurkat、Raji）等。其中，THP-1细胞是建立脓毒症细胞模型最常用的细胞系之一。

2.刺激细胞：将细胞刺激以模拟感染状态，可以使用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等病原菌或它们的成分如LPS（脂多糖）刺激细胞。刺激时间和刺激剂量需要进行优化和控制，以模拟不同程度的感染状态。

3.检测生理指标：在模拟感染状态后，检测细胞中的生理指标，如细胞存活率、细胞因子分泌、凋亡率、ROS（活性氧）水平等，以评估细胞模型的有效性和稳定性。

4.检测分子机制：通过Western blot、Real-time PCR等技术检测相关分子机制，如NF-κB信号通路、TLR（Toll-like receptor）信号通路等的激活和参与情况，以深入研究脓毒症的分子机制。

需要注意的是，脓毒血症细胞模型只能模拟感染状态下的生理和分子机制，不能完全代替动物模型。因此，在使用脓毒血症细胞模型研究脓毒症时，需要综合考虑动物模型和细胞模型的结果，以更好地理解脓毒症的发生机制。