Annexin-FITC/PI染色 结果异常

可能存在情况:

1，细胞状态不好;

2，细胞收集后存放的时间太长，没有及时染色;

3，细胞表面原有的PS相对较多，应选用低浓度的AnnexinV标记;

4，PBMC表面往往有血小板黏附在细胞表面，造成Annexin V阳性率偏高;

5，过分吹打、震荡或胰酶消化等，可能使PS暴露出来。

先排除看是否存在杂质细胞污染，如果凋亡太多可能是存在污染物质导致细胞群出现异常。

染色过程中需要多步离心，因此操作十分重要，主要是要注意吹打混匀一定要轻柔，避免细胞物理损伤。

Annexin V-FITC/PI染色用于检测凋亡细胞，FITC染料用于检测细胞表面的凋亡标志物Annexin V，而PI染料用于区分凋亡和坏死细胞。如果您的实验结果显示FITC信号上升很多，而未处理组却没有明显的凋亡，可能是染色或实验步骤出了问题。以下是可能导致这种情况的一些原因：

实验样本处理过程中的机械损伤或其他非凋亡原因导致了Annexin V的表达上调。在分离细胞或处理组织的过程中，如果细胞受到过度机械损伤，Annexin V表达可能会上调，导致假阳性结果。

染色操作不当导致假阳性结果。如果您的染色操作不正确，可能会导致细胞假阳性，特别是如果您未能充分洗涤未结合的染料。

染色试剂盒存在问题。虽然试剂盒经过了质量控制，但是仍有可能存在批次差异或质量问题，这也可能导致假阳性结果。

建议您重新检查您的实验操作，包括样本处理和染色过程，以确认您的结果是否准确。如果您确定实验操作正确且结果异常，则可能需要考虑尝试其他方法来检测细胞凋亡，例如TUNEL染色或Western blotting。