【求助】Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒的使用
丁香园论坛
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我买了Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒,想研究某种材料的细胞毒性,看其是否会诱导细胞凋亡。之前做过MTT之类的检测,结果显示材料基本无毒性。
由于条件限制(流式细胞仪在我们学校另一个校区)不能及时进行检测,前两天进行了一次实验,是将细胞收集后拿到测试地点再进行的荧光染色处理,检测结果显示阴性对照组没有加材料处理的细胞也多处于凋亡状态,个人猜测可能跟细胞在路上耽误的时间有关(悬浮在Annexin V结合液中,冰盒中保存,距离染色有2小时之久)。
不知道这种情况是否还有其它原因?想请教下这种情况有没有什么好的处理方法?比如说能否将细胞先按照试剂盒说明染色完成后进行固定?如果先固定的话有什么方法不会破坏细胞膜的通透性吗?否则先固定再染色布都是死细胞了吗,PI都呈阳性了,这个该怎么处理呢?
另外,染色后是否需要离心去除细胞悬液中的背景荧光呢?有人建议离心,可是说明书上又没有提到离心操作?
期待懂行的朋友的回复!不胜感激!
由于条件限制(流式细胞仪在我们学校另一个校区)不能及时进行检测,前两天进行了一次实验,是将细胞收集后拿到测试地点再进行的荧光染色处理,检测结果显示阴性对照组没有加材料处理的细胞也多处于凋亡状态,个人猜测可能跟细胞在路上耽误的时间有关(悬浮在Annexin V结合液中,冰盒中保存,距离染色有2小时之久)。
不知道这种情况是否还有其它原因?想请教下这种情况有没有什么好的处理方法?比如说能否将细胞先按照试剂盒说明染色完成后进行固定?如果先固定的话有什么方法不会破坏细胞膜的通透性吗?否则先固定再染色布都是死细胞了吗,PI都呈阳性了,这个该怎么处理呢?
另外,染色后是否需要离心去除细胞悬液中的背景荧光呢?有人建议离心,可是说明书上又没有提到离心操作?
期待懂行的朋友的回复!不胜感激!
按说在AnnexinV结合液中保存两个多小时是没有问题的,前几天有同学遇到细胞死亡过多的情况,结果是细胞在培养箱里被支原体污染了没有发现。
你用的冰盒是冰块还是碎冰?建议放在碎冰里
测凋亡不能固定的,固定细胞都死了,还测什么呀
染色后不用去背景荧光的吧,我们这里都是先加200ul buffer+5ul AnnexinV,过半个多小时后再加200ulbuffer+5ul PI,
然后染十几分钟就开测了。多做几次吧,重复一下
你用的冰盒是冰块还是碎冰?建议放在碎冰里
测凋亡不能固定的,固定细胞都死了,还测什么呀
染色后不用去背景荧光的吧,我们这里都是先加200ul buffer+5ul AnnexinV,过半个多小时后再加200ulbuffer+5ul PI,
然后染十几分钟就开测了。多做几次吧,重复一下
mmsong1987 wrote:
我买了Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒,想研究某种材料的细胞毒性,看其是否会诱导细胞 ...
收细胞的时候转速要低于2000,还要看你收要细胞时候细胞状态,以及你处理过程中的操作……
Annexin V-FITC/PI 可以再原位进行检测么??
另外楼主用的是什么材料??细胞在铺在材料上边,还是包埋在材料内部??
另外楼主用的是什么材料??细胞在铺在材料上边,还是包埋在材料内部??
无图无真相啊!
请教楼主,我现在遇到的问题和以你一样,请问你的问题解决了,方便传授下经验么?谢谢哈
染色完了再固定。上机前加PI。过夜都可以测的。先固定的处理有可能会印象抗原的表位。
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