茜素红染色
xuweijia
茜素红染色：
用索莱宝茜素红染料做MOVAS茜素红染色，β-GP诱导钙化的模型，怎么对照组也会被染成红色，各组间无差异呢？
有没有大神做过，能不能传授下经验？
3 个回答
月牙芽呀
会不会是染液没洗干净呢？我上一次是染出来褐色，也不知道什么原因
xuweijia
谢谢回答，我觉得我洗干净了呀，我用dd水洗的，洗3次后水都清亮了
Dr_劉医生
对照组也有染红，提示可能组织有钙质变化。
茜素红染色的步骤和注意要求：
1. 成骨诱导分化结束后，吸去六孔板中的成骨诱导分化完全培养基，用1×PBS轻柔洗涤2~3次。
2. 每孔加入2mL 4%多聚甲醛溶液（或10%福尔马林），室温固定30min。
3. 吸去固定液，用1×PBS轻柔洗涤2~3次，确保将固定液清洗彻底。
4. 每孔加入2mL茜素红工作液，室温染色5~10min。
5. 吸去茜素红染色液，用1×PBS轻柔洗涤2~3次，充分洗去多余染色液。
6. 每孔加入2mL 1×PBS，将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果。
7. 染色后的六孔板用封口膜封装后，置于4℃可保存2周。
注意要点
1. 为防止钙结节脱落，所有操作尽可能轻缓。
2. 茜素红使用前请恢复至室温。
3. 不能以诱导时间决定染色时间，而务必以镜下可见聚集的钙结节为准。
4. 时间控制在5min左右，如果染色效果较浅可以适当延长时间。
xuweijia
谢谢指导！我看有人说洗掉茜素红要用dd水，不然会把染上的也洗掉，是这样吗？我的茜素红使用前没有恢复室温，会不会是这个原因造成染色不好？如果细胞生长过密是不是也会出现钙化？我的茜素红加入皿中会有絮状物，不知道为啥，下次拍给大家看看
土井挞克树
对照组可能存在目标物质的污染所以有染色。
xuweijia
我也考虑过这种情况，我对照组细胞很密集，如果细胞过密会导致老化和钙化的话，确实有可能阳，但不应该没差异啊
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