proDR
求助,悬浮细胞铺板一万个,cck8需要4个小时对照组OD值才到1左右,是细胞状态不好吗,我以前铺板五千个,要等六个小时才到1。😭是因为我铺板混匀的时候吹打太多下了吗,每次铺完板,细胞都吹的是一个一个的。
loveliufudan
可能存在以下几个问题:
细胞密度过高:您在铺板时使用了1万个细胞,这可能导致细胞在生长过程中会产生自我抑制,影响其生长速度和代谢能力。建议尝试调整细胞密度,控制在5000个左右。
细胞状态不佳:细胞状态不佳也可能是导致您CCK-8试验OD值上升缓慢的原因之一。您可以检查细胞是否有感染、过度培养或其他异常情况。此外,确保细胞在培养和铺板过程中没有受到过度的机械剪切和物理力,这也可能导致细胞受损。
混匀不均:您提到在铺板过程中吹打太多,这可能导致细胞混匀不均,一些细胞生长得更快,一些则可能会受到机械性的损伤,从而影响细胞的生长速度和代谢能力。建议使用更加轻柔的混合方法,如旋转或振荡器,以确保细胞混匀均匀。
试剂和培养条件问题:最后,如果以上问题都已解决,您也可以尝试优化试剂和培养条件,如优化培养基、添加生长因子或其他辅助物质等,以促进细胞的生长和代谢。
z流沙z
首先来说4h的OD为1,应该也是满足实验要求了,其次细胞不要吹打太多,传代离心后充分重悬混匀即可
毛利小五郎的徒弟
吹打次数太多了降低了细胞密度就会这样
sswei
一般悬浮细胞孵育的时间要长于贴壁细胞,一般贴壁细胞孵育2 h左右,悬浮细胞是4 h左右,由于CCK-8的OD值处在0.8-1左右是比较好的检测结果,建议实验者可以每隔0.5 h测定一次OD值,以摸索出最佳孵育时间。