悬浮细胞转染后筛选问题求助

问：

大家好，我第一次作转染，是悬浮细胞，

已经在园子里看了好多这方面的资料，收获很大，可还是几个问题要问大家：

1）我打算用24孔板作转染，之后的筛选过程中肯定会有很多死细胞。这样小的体积（500μl），能不能作低速离心去死细胞呢？如果不能，要怎么去除死细胞呢？

2）在96孔板每孔1个细胞的筛选的过程中，大家一般种多少孔进行筛选呢？

3）96孔板筛选过程中，每个孔体积那么小要不要换液呢？需要的话该怎么换呢？？

4）长到啥时候可以扩大培养呢？

第一次作，问题问的比较多，请各位指点。谢谢！

答：

1.悬浮细胞是不能通过低速离心去除的，可以通过密度梯度离心去除，或者就是不断的换液，通过换液来稀释死细胞。

2.96孔板筛选的时候中间的孔都可以种上，四周的孔不要种，用PBS填充即可

3.每孔1个细胞的时候不用换液，可以连续培养20天，然后再转移到24孔板里继续培养

4.当你检测转染的细胞发现目的基因已经整合至基因组中并开始稳定表达目的蛋白的时候就可以扩大培养了。

一家之言