斯人若虹Long
想问一下,目的基因连接到载体上,转染悬浮细胞并收样,做WB,却得到了两个条带,一个正确的目的条带,还有另外一个多10kD的条带。想知道问什么会表达出这个多10kD的蛋白?
土井挞克树
可能是存在样本降解出了这一个条带,或者其他杂质污染了。
loveliufudan
出现多余的10kD条带可能有以下几种原因:
载体DNA本身的问题:载体DNA可能存在杂交或者重组等情况,导致额外的10kD条带出现。
转染后的不同表达水平:悬浮细胞中的表达水平可能因为不同的原因(例如细胞的状态、载体的浓度等)而不同,所以可能会出现不同强度的条带。
载体插入位置的问题:插入载体的位置可能会影响目的基因的表达。如果插入的位置比较靠近其他基因,可能会导致它们之间的交叉表达,从而产生额外的条带。
前体蛋白的剪切问题:有些蛋白质需要经过剪切才能变成成熟蛋白。如果这个过程出现问题,可能会导致额外的条带出现。
要确定多余的10kD条带的来源,可以考虑以下步骤:
检查载体DNA的完整性和纯度,确保它没有发生杂交或重组等问题。
检查表达情况,如果目的基因和多余的条带的表达水平差异很大,可能是因为表达水平不同所导致的。
分析载体插入位置,如果插入的位置比较靠近其他基因,可能会导致它们之间的交叉表达。
进一步检查目的基因的前体蛋白,看是否发生了剪切问题。
sswei
可能存在裂解不彻底,上样量过多等原因。
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