毛利小五郎的徒弟
我的做法是离心1000rpm,五分钟,过程尽量避免摇动离心筒,如果细胞少的话,可留少许上清,基本不会丢失细胞.
如果是吸走培养液的话,再加新的,就等于传代了
loveliufudan
换液和吸出悬浮细胞团的方法可能因实验设计和具体细胞类型的不同而异。下面是一些通用的步骤和技巧,供参考:
换液:
1.使用无菌技术。在操作之前,请确保所有使用的工具和材料都已经进行灭菌处理,并在无菌条件下操作。
2.取出培养皿中的旧培养液,可以使用吸管或注射器,尽量避免吸取细胞团。
3.加入新的培养液。通常建议用与旧培养液成分相同的新培养液,以避免对细胞产生不必要的影响。
4.注意不要扰动悬浮细胞团。当加入新培养液时,可以将液体缓慢地倒入培养皿的侧壁上,以减少液体对细胞的机械刺激。
吸出细胞团:
1.使用无菌技术。在操作之前,请确保所有使用的工具和材料都已经进行灭菌处理,并在无菌条件下操作。
2.选择合适的吸取工具。可以使用吸管、注射器或者其他吸取器具,具体根据实验需求和细胞类型而定。
3.吸取细胞团。将吸取工具缓慢地放入液体中,以避免扰动悬浮细胞团。如果需要,可以轻轻摇晃培养皿,使细胞更加均匀地分散在培养液中。
4.注意不要让细胞受到机械刺激。在吸取细胞团时,要尽量避免使用过大的吸取力度,以免对细胞产生不必要的机械刺激。
sswei
当细胞生长状态不错,或者显微镜下观察细胞液中不是很干净时,可以选择用PBS清洗。细胞半量换液,即弃掉一半旧的培养基,再加一半新的进去。选它的原因其实与前面不加PBS的理由有点相近。
1.如果细胞抱团不影响生长就没问题,只是计数时较麻烦。在消化时,可在细胞由多角形变成圆型之前,用手轻磕培养瓶的侧壁,使细胞从壁上脱落(最好不要吹打,对细胞形状和生长都不好)。
2.如果感觉有死细胞的DNA,在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse()(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞,防止对细胞膜造成物理损伤。
3.如果细胞抱团是肉眼可见的,可让细胞静置半分钟左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,目前还没有特别好的分离方法,只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。