土井挞克树
增加骨髓的样本量,然后提取过程减少破坏,可以多提取一些。
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可以按以下几点进行操作:
1、使用更有效的破碎/匀浆方法。RNA如果不能被有效释放出来,得率是会降低的。液氣捣碎、酵消化破壁(Lysozyme/Lyticase)、电动匀浆器匀浆,虽然麻烦,但都是获得高得率的有效手段。
2、抽提试剂的更换。假如得率低不是由匀浆方法不彻底引起,则可能是所使用的试剂的裂解能力差导致。最合理的做法是:使用更多的裂解液;用完后换厂家。另外,可以改用不使用苯纷、氯访提取的试剂方法;使用苯纷、氛仿抽提的方法,由于不可能全部取出上清,RNA的损失是比较大的。
3、延长沉淀时间。如果核酸浓度低,采取低温沉淀、并延长沉淀时间,可以获得非常好的效果。
4、RNA提取过程中最应该注意的就是RNA酶的防止,所有操作在超净台完成,然后一定要带一次性手套,而且一直要换。严格按规程操作。
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骨髓细胞提取RNA 产量低于您对样品的预期,则需要考虑许多因素。通常,这是一个裂解问题。不完全裂解是产量低的主要原因。它也可能是由不正确的绑定条件引起的。确保使用新鲜的优质乙醇(100% 200 标准)稀释缓冲液或添加到结合的步骤。劣质乙醇或旧库存可能已经吸收了水分,并且浓度不正确。如果洗涤缓冲液制备不正确,您可能正在洗掉提取的 RNA。
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可以加入rna助沉剂,对于这种情况很实用
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如果骨髓细胞提取的RNA量太少,无法进行实验,可以尝试以下一些方法来提高RNA的产量:
收集更多的细胞:尝试使用更多的细胞来提取RNA,这可能会增加RNA的产量。可以尝试增加细胞的数目或者收集更多的样本。
优化细胞裂解条件:尝试使用更加强力的细胞裂解条件,例如使用更多的Trizol试剂、更长时间的酶解和更高强度的震荡等,以确保细胞的完全裂解,从而提高RNA的产量。
使用RNA放大方法:如果提取的RNA量仍然很少,可以使用RNA放大技术,如RT-PCR、RNA-seq等。这些方法可以扩增RNA分子的数量,使得实验可以进行。
尝试其他RNA提取方法:如果Trizol法无法提取足够的RNA,可以尝试其他RNA提取方法,例如琼脂糖柱法、磁珠法、固相萃取法等等。不同的方法有不同的优缺点,可以根据实验需要选择最适合的方法。
总之,如果RNA量太少无法进行实验,应该尝试不同的方法来提高RNA产量,以确保实验可以成功进行。
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