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分子克隆PCR没有目的条带只有引物二聚体,救救孩子吧

相关实验:用克隆环分离细胞克隆

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需要努力的人66CW

做了4个月左右了 目的基因2k左右 分别使用fast LA KOD酶都没有扩出目的条带 引物tm值60左右 退火温度55度 结果如下图

体系50ul

模(mú)板1

引物1

酶1

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2 个回答

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loveliufudan

有帮助

下面是一些可能的原因:

1.引物设计问题:如果引物设计不当,可能会导致二聚体的产生而不是目的条带。

2.PCR条件问题:如果 PCR 条件不当,例如温度过高或过低,可能会导致二聚体的产生。

3.模板 DNA 量问题:如果模板 DNA 量过少或过多,可能会导致 PCR 不成功。

4.污染:实验过程中的污染也可能会导致 PCR 不成功。

对于这种情况,可以尝试重新设计引物,调整 PCR 条件,确保模板 DNA 量。

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huarenqiang5

有帮助

可以尝试以下方法优化:

1.确定DNA模板为阳性,即确定含有目标序列;

2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有目标条带,即使可能并不清晰;

3.选取最清晰的温度,在PCR体系中设置镁离子浓度梯度,选取最理想的条件;

4.模板DNA的质量、尤其是PH值;

5.实验的细节、所用试剂和反应条件。

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