需要努力的人66CW
做了4个月左右了 目的基因2k左右 分别使用fast LA KOD酶都没有扩出目的条带 引物tm值60左右 退火温度55度 结果如下图
体系50ul
模(mú)板1
引物1
酶1
loveliufudan
下面是一些可能的原因:
1.引物设计问题:如果引物设计不当,可能会导致二聚体的产生而不是目的条带。
2.PCR条件问题:如果 PCR 条件不当,例如温度过高或过低,可能会导致二聚体的产生。
3.模板 DNA 量问题:如果模板 DNA 量过少或过多,可能会导致 PCR 不成功。
4.污染:实验过程中的污染也可能会导致 PCR 不成功。
对于这种情况,可以尝试重新设计引物,调整 PCR 条件,确保模板 DNA 量。
huarenqiang5
可以尝试以下方法优化:
1.确定DNA模板为阳性,即确定含有目标序列;
2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有目标条带,即使可能并不清晰;
3.选取最清晰的温度,在PCR体系中设置镁离子浓度梯度,选取最理想的条件;
4.模板DNA的质量、尤其是PH值;
5.实验的细节、所用试剂和反应条件。
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