【求助】神经干细胞培养一定要加EGF吗？

各位战友，本人在一开始培养NSCs的时候只购买了bFGF，配方为：

DMEM/F12+2%B27+bFGF（20 ng/ml）+1%双抗

步骤如下：

1、孕16 d sd大鼠脱颈椎处死，取胎鼠皮层；

2、木瓜蛋白酶（2 mg/ml）37℃消化30 min，10%FBS培养基双倍体积终止消化后，5 ml巴氏吸管吹打十次，离心（200xg，5 min）去上清；

3、HBSS重悬，并用40 um细胞筛过滤，细胞悬液离心（200xg，2 min）去上清；

4、细胞计数，按照5x10^6接种于100 mm皿内

一般第二天成球，在园子里潜水了一段时间，发现各位战友都加了EGF，只有很少几位提到没加。大部分文献也加了，偶有几篇英文文献也没加，所以比较纠结的是后续要不要加

目前我的状况是原代第二天就能见到球，也染过nestin（+），但观察到各位战友接种密度很小，我又比较怀疑这些球是聚集在一起的还是增殖的

原代第二天🔽后期🔽：

之前我也试过1x10^6，细胞长得很慢，又去找了gibco的培养方案，里面提到神经球悬浮培养：

还有一个很大的困难，干细胞球咋弄成单细胞悬液，试过园子里的将吸管拉长、干细胞分离液等等方法，还是不太行