血吸附实验的具体操作步骤？

.2 方法
1.2.1待检样品制备
将待检细胞经无抗生素培养基传1代，取三天未换液的且已长成单层的细胞，反复冻融3次，1000rpm离心15min除去细胞碎片，收集上清液，过滤除菌后即为待检样品。悬浮培养型细胞直接冻融后离心，同法制备待检品。
1.2.2 接种培养
1) 致细胞病变试验
二倍体细胞、Vero细胞以及与待检细胞同种属同组织类型的细胞，每组细胞6瓶，每瓶20ml，每瓶接种待检样品3ml。于5%CO2培养箱36℃±1℃培养21d。同时设立细胞阴性对照和阳性对照。阳性对照接种100μl稀释至10-3的脑心肌炎病毒。在培养过程中每7天进行传代，期间根据细胞生长情况更换细胞培养液。显微镜下观察并记录是否有细胞病变出现。
2) 血吸附试验
在观察期的第7d、14d和第21d，分别取2瓶细胞，弃去细胞培养液，用无钙镁PBS将细胞单层轻轻冲洗3遍。加入20ml的豚鼠红细胞和鸡红细胞混合悬液（加入前应混匀），使之均匀的覆盖在细胞单层上。加入红细胞悬液后将细胞单层置2～8℃ 30min，然后置20～25℃ 30min，然后用PBS轻轻冲洗3遍分别进行镜检，观察并记录细胞单层红细胞吸附情况。
1.2.3 结果判定
1)致细胞病变试验
阳性对照应出现典型的细胞病变；阴性对照应无任何细胞病变出现。接种待检样品的细胞组均不出现任何细胞病变，则待检细胞致细胞病变试验判为阴性。
2)血吸附试验
阳性对照应出现红细胞吸附，阴性对照应无红细胞吸附。接种待检样品的细胞组均不出现红细胞吸附，则待检细胞血吸附试验判为阴性。
3)观察期内接种待检样品的细胞组细胞形态正常、致细胞病变试验阴性且血吸附试验阴性，则待检细胞无病毒外源因子污染，判为阴性（—）；若观察期内接种待检样品的细胞组中任一细胞出现致细胞病变试验阳性或血吸附试验阳性时，则待检细胞存在外源因子污染，判为阳性（+）。