showme5267
我做的是甲状腺未分化癌干细胞的培养,用的细胞系(8505C,CAL62),用的是无血清培养法,DMEM/F12+B27+EGF+bFGF。最近培养发现一个比较难受的问题,刚开始培养悬浮细胞很多,经过2-3次传代或换液,细胞大面积贴壁,用胰酶消化后重新悬浮,仍有大量细胞贴壁,我每次已经多次用PBS洗细胞,换过好几种无TC处理的培养瓶,但还是出现这种情况,很困惑,请高手帮忙解答,谢谢
麻黄连翘赤小豆
建议不要太过频繁的传代和清洗,本身胰酶对细胞是有损伤的,贴壁细胞没用了,已经老化,把剩下的悬浮细胞好好培养
showme5267
我现在很少用酶消化了,直接离心后换液,但是还是贴壁啊
Eason老歌迷
其实你这里认识有点误区,就是悬浮细胞一定不会贴壁,事实上没有完全不贴壁的细胞,据我所知,细胞贴壁依赖的是细胞表面的桥粒结构,这种结构其实各种类型的细胞上都有,只是实质组织来源的细胞更加密集而已,而其他本来就是单独存在的细胞比如淋巴细胞上这种结构很少而已。但是少并不意味着就不能贴壁。我养巨噬细胞的时候也是,一半贴壁一般悬浮,而且贴壁的细胞相当牢固,必须用胰酶消化才行。
whilt-shirt
这种情况有可能是细胞已经分化了
showme5267
那如何避免这种分化现象的出现呢