Eason老歌迷
你可以先参考这篇文献,“离体神经干细胞氧糖剥夺模型的建立及改变培养条件对神经干细胞的影响分析”。还有这一篇“ PC12 细胞中持续性氧糖剥夺模型的建立”,讲的都很详细。
你好几和户
1.一般做糖氧剥夺需要铺两个相同的板相同指的是同一细胞悬液同一细胞数目 根据缺氧的时间铺相应的细胞数一块板为正常组不对其进行缺氧另一块为缺氧组进行缺氧。2.等到第二天需要预处理的先加入相应保护剂/抑制剂然后补全液体量等到预处理完毕对两个细胞板进行换液不需要预处理的可以直接换液建议以每一竖列为一个单位细胞在长时间无培养基的情况下会影响细胞状态 缓慢抽出每个孔的培养基在每个孔里加入PBS加完之后拿起板前后左右轻轻晃动3~5次抽出PBS加入无糖无血清的MEM根据自己实验加入相应的培养基以此类推换完液体后再次加入相应的保护剂/抑制剂补全液体量。3.在对细胞进行缺氧前需要把缺氧装置在操作台里照上15~30分钟然后把已经处理好准备缺氧的细胞放进去盖上盖子及关闭相应的阀门并连接已充满混合气体的氮气罐5%CO和95%N打开氮罐的气体阀门调节流量20~25L/min 建议通气时间为5~6分钟缺氧装置密闭体积为100L 关闭时先关闭氮气阀门然后关闭缺氧装置的阀门。放入孵箱开始计时缺氧时间。4.待细胞缺氧完成测相应的数据。 LDH需要抽取相应的上清液到96孔板进行测定MT T测量时需加入相应体积的MTT进行测定 。