氧糖剥夺求助

你可以先参考这篇文献，“离体神经干细胞氧糖剥夺模型的建立及改变培养条件对神经干细胞的影响分析”。还有这一篇“ PC12 细胞中持续性氧糖剥夺模型的建立”，讲的都很详细。

1.一般做糖氧剥夺需要铺两个相同的板相同指的是同一细胞悬液同一细胞数目 根据缺氧的时间铺相应的细胞数一块板为正常组不对其进行缺氧另一块为缺氧组进行缺氧。2.等到第二天需要预处理的先加入相应保护剂/抑制剂然后补全液体量等到预处理完毕对两个细胞板进行换液不需要预处理的可以直接换液建议以每一竖列为一个单位细胞在长时间无培养基的情况下会影响细胞状态 缓慢抽出每个孔的培养基在每个孔里加入PBS加完之后拿起板前后左右轻轻晃动3~5次抽出PBS加入无糖无血清的MEM根据自己实验加入相应的培养基以此类推换完液体后再次加入相应的保护剂/抑制剂补全液体量。3.在对细胞进行缺氧前需要把缺氧装置在操作台里照上15~30分钟然后把已经处理好准备缺氧的细胞放进去盖上盖子及关闭相应的阀门并连接已充满混合气体的氮气罐5%CO和95%N打开氮罐的气体阀门调节流量20~25L/min 建议通气时间为5~6分钟缺氧装置密闭体积为100L 关闭时先关闭氮气阀门然后关闭缺氧装置的阀门。放入孵箱开始计时缺氧时间。4.待细胞缺氧完成测相应的数据。 LDH需要抽取相应的上清液到96孔板进行测定MT T测量时需加入相应体积的MTT进行测定 。