低内毒素质粒抽提如何降低RNA污染

冬天提取质粒DNA的时候，直接把快速质粒DNA小量试剂盒放到恒温箱里温育（反正Buffer II冬天会结晶，就是需要提前温育的）到37℃后再使用。把实验室的空调开高一些，等温度升高后再做实验（记得有一年实验室一直不能重复出用户投诉的RNA污染结果，现在怀疑和空调温度打得太高了也有一定的关系）。不要急着做实验，把养好的细菌凉一凉再做（等个4~5个小时，因为细菌在不良的生长环境下会减少新陈代谢，RNA会自行降解掉一部分）。减少细菌的用量，RNA酶需要消化的RNA总量就减少了。

加RNase A 消化去除RNA。可以先加1 ul或2ul，37度水浴1-2小时（如果RNA实在太多，仍可消化过夜），然后取一点电泳看看RNA是否已去除。

作为要求严格的实验在消化后最好再进行氯仿抽提一下去除RNase

通过Bio-Gel A-150m或Sepharose CL-4B进行层析，去除RNA污染