细胞分离中如何降低污染 专家有妙招

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Stemcell公司是一家致力于开发生命科学领域细胞培养 基、细胞分离和相应试剂的生物技术企业，所开发的上千产品已销往全球70多个国家和地区。在血小板的细胞分离上，Stemcell的专家经验丰富，向我们分享了不少操作心得：

血小板与红细胞、白细胞并称三大血细胞，有凝血作用。血小板是由骨髓中成熟的巨核细胞裂解，胞质脱落而形成的，每个巨核细胞可产生2000～7000个血小板。血小板很粘稠，而且特别喜欢与单核细胞黏在一起。

StemCell 的大部分阴性选择试剂盒都包含了一个细胞表面标志物，能选择性去除血小板。然而，单核细胞富集试剂盒及其他少数试剂盒不能靶定血小板，然后将其清除，因为那样会去除单核细胞或其他想要的细胞类型。因此，在分离单核细胞时，我们就必须采取措施来降低血小板污染。

在制备单核细胞悬液时，Stemcell给出了如下的建议：

1. 从Ficoll密度梯度离心中取出单核细胞层时，避免吸到富含血小板的血浆。

2. 缓慢离心，洗涤单核细胞(120×g，10分钟，常温)。

3. 小心弃上清，其中含有血小板，用新鲜的缓冲液重悬细胞(记得换个干净的吸头)。

4. 重复上面2步，总共洗涤3次。

另外，Stemcell还给出了一些降低血小板污染的其他建议：

• 使用大口径的针来抽取血液样本

• 轻轻地抽血，如果使用注射器推杆，不要大力牵引

• 抽血时使用更多的抗凝血剂，比如，增加肝素、EDTA 或ACD的量

• 使用不含钙镁的缓冲液进行洗涤和细胞分离

• 在细胞分离缓冲液中使用更高水平的EDTA(2或3 mM)

• 确保轻柔操作，不要震荡

Stemcell公司的产品包括：检测造血干细胞功能的半固体培养基MethoCult®和 MyeloCult®系列，培养和鉴定间充质干细胞的MesenCult®系列，培养和分析神经干细胞的NeuroCult®系列，培养胚胎干细胞和多能干细胞的Es-Cult®系列产品，可以分选各种细胞的免疫磁性分选系统EasySep®，全自动细胞分选仪RoboSep®，全自动克隆挑选系统 EasyPick®，及与其配套使用的ClonaCell®-HY试剂等等。

血小板是三大血细胞之一，在培养过程中由于黏性很大，还有容易污染，在培养中是一类不好对付的细胞。Stemcell认为，在制备血小板细胞悬液时，要使用大口径的针抽取样品，动作轻柔。