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目前采用Ficoll密度梯度离心,但是目的产物总会有红细胞,求提高收率的方法或者去除这些红细胞的方法,或者平时实验的时候需要注意哪些细节呢?
huarenqiang5
注意事项:
1.将血液进行稀释可降低血液黏稠度和红细胞的聚集,提高单个核细胞的收获量。
2.温度变化可直接影响分层液的密度,即影响细胞的收获率和纯度。故应在室温(18~25℃)下进行实验,分层液使用前应预温至室温。温度过低,淋巴细胞丢失增多;温度过高,会影响淋巴细胞活性。
3.分离时的转速与时间应根据不同样品作相应调整。离心速度在2000~2500r/min,离心时间为15~20min,离心后若见白雾状细胞层中仍掺杂红细胞,应提高转速或延长离心时间,若淋巴细胞丢失过多,则应适当降低转速或离心时间。
4.分层液应直接加入管底,防止浸沾四周管壁。
5.将细胞悬液叠加于分层液上时务必小心,不要扰乱界面以影响分离效果。
6.充分冼涤分离后的单核细胞,可除去大部分混杂的血小板。
juyue2010
推荐使用stem cell的PBMC分离试剂和专用分离管,之前用过很方便,分离时间很短。红细胞污染少
毛利小五郎的徒弟
一般都是Ficoll分离,你可以延长离心时间提高分离率。