Eason老歌迷
感觉还是传代时消化过头,以至于细胞老化(胞浆出现明显黑色颗粒是细胞老化的标志),现在我采取的消化传代方法是:1,先用PBS细两遍,以去除残余血清对胰酶消化的影响2,加适量胰酶(以能铺满瓶底为宜),镜下观察见饱体回缩时即倒去胰酶3, 利用剩下的一点点胰酶再消化,此时可以放入37度温箱中4,隔半分钟到一分钟将细胞拿出,侧拍瓶壁(用力),镜下可见细胞基本都已掉下来,此时可以加含血清培养基中和,再用吸管吹瓶壁,这样能再吹下来一些细胞
whilt-shirt
有可能是细胞纯度不高,建议重新提取细胞试试
天一湖医者
这个可以考虑是传代过程中污染了。