Keven轩
提的DNA经PCR及琼脂糖凝胶电泳后没区别,都有目的基因的阳性条带。一般像构建细胞系用稳转,想快速获得大量目的基因表达产物用瞬转
天一湖医者
瞬时转染与稳定转染都是将目的基因转染至特定哺乳动物细胞内,进而表达得到目的蛋白。不同的是瞬时转染的方式外源基因并没有转染到细胞的染色体上而是存在于游离的载体上,这样可以在短时间内获得基因的表达产物,但是随着细胞的不断分裂增殖外源基因最终会丢失,无法继续进行重组蛋白的生产;而利用细胞稳定转染则会将外源基因转染至细胞染色体上,目的基因不会随着细胞传代而消失,稳定转染的细胞株能够长期稳定的生产目的蛋白。瞬时转染表达和稳定转染表达最显著的区别就是在时间上。瞬时转染在转染后四天即能收获细胞,瞬时转染一般用于基因产物的短期表达、蛋白质的小规模合成。相对于瞬时转染,稳定转染表达适用于长期的药理学研究遗传调控机制研究及大规模的蛋白质合成,需要大量的周期,因此更费力成本投入高。目前,在进行哺乳动物细胞蛋白表达时,因为细胞培养技术的进步和人们对瞬时转染的不断探索,人们已经可以对一些常用细胞进行悬浮培养,实现了瞬时转染对重组蛋白的大规模合成,节省了时间和成本。
未来9
瞬时转染只是质粒进入了细胞核并表达,由于其不能复制,随着细胞不断变多,平均每个细胞中的质粒数不断变少,效果不断降低,直至消失。
稳定转染是在瞬时转染的基础上产生的,由于转入细胞核的质粒有很小的概率整合进宿主的基因组中,所以可以用一些抗生素将这种细胞筛选出来并扩大培养,由于质粒稳定的进入了基因组,所以效果稳定存在。
稳转还是顺转主要还是和实验目的有关,区别是一种基因对细胞短时或是长时的影响,看到的效果可能不同甚至相反。
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