您好，请问怎么hoechst染液检测？hoechst有好几种，该用后面是哪一种编号的呢？

Hoechst 33342，也称bisBenzimide H 33342或HOE 33342。

分子式为C27H28N6O·3HCl·3H2O，分子量为615.99。Hoechst 33258，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258。

分子式为C25H24N6O·3HCl，分子量为533.88。

两种染料都是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。但是hoechst 33342对细胞的毒性作用更小一些，33258穿透能力较33342弱，染活细胞时容易被"泵出"，也就是拒染。所以一般来说hoechst 33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色。

1.对于固定的细胞或组织:

a.对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧

光染色，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst

33342 染色。

b.对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可;对于悬浮细胞，至少加入

待染色样品3倍体积的染色液，混匀。室温放詈 3-5分钟。

c.吸除Hoechst 33342 染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

d.直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致独

浓染，或旱碎块状致密浓染。

2.对于活细胞或组织:

a.加入适当量Hoechst 33342染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入Im

染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。

b.在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。

Hoechst-PI染色法检测（1）定期准备单细胞悬液；（2）加入Hoechst 33258溶液使终浓度为1mg / ml，溶于37℃水7分钟；（3）在冰上冷却，离心除去染色液，重悬于PBS中。（4）加入PI染料溶液至终浓度5mg / ml，冰浴；（5）离心并弃去染色液，用PBS洗涤一次，用流式细胞仪分析，并通过直接激光检测记录400?500nm的蓝色荧光和大于630nm的红色荧光。