Hoechst染色的讨论

Hoechst染色的具体步骤

caspase8428：我看到资料上说，荧光染色的时候可以用DAB与荧光物质反应生成沉淀。那么，Hoechst染色时，什么时候加DAB，浓度是多少，用什么稀释，最后怎么来终止反应？是不是还要用抗退色固片介质来封片？

sunandsuny：Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发后发出蓝色荧光。如果你是用来染培养的细胞的话，可以参考下面的步骤（切片雷同）：

细胞涂片：甲醇：冰乙酸（3：1）固定15分钟，PBS洗一次，加Hoechest 33258荧光染料37℃孵育15~30分钟，于荧光显微镜下观察。凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。操作比较容易的。

altbenair: 想做肝癌细胞 hepG2。看过很多帖子 还有文献上的方法，但是都不太具体

大都是这样：固定（福尔马林4%），pbs洗三遍，加hoechst孵育1H，将细胞悬液滴于载玻片上

荧光显微镜检测。细胞悬液怎么做？我要做贴壁细胞 用胰酶消化？

drake015: .

1．贴壁细胞 ，让细胞自己在盖玻片上爬片。操作如下：

A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。

B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。

C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。

D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。

E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。

F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，切勿弄反。

G. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。

2. 悬浮细胞

A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。

B. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。洗涤期间手动晃动。

C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。

D. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。

E. 均匀滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。

F. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。

G. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。

H. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。

3. 组织切片

A. 常规包埋切片后，脱腊，透明。

B. PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。可在六孔板中操作。

C. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动。

D. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。

E. 将切片置于载玻片上，滴一滴抗淬灭封片液，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。

F. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。

ylcui:

产品简介：碧云天生产的细胞凋亡－Hoechst染色试剂盒为您提供了一种快速简便的细胞凋亡检测方法。细胞发生凋亡时，染色质会固缩。所以Hoechst染色时，细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染，参见本页照片（贴壁细胞）。

1、只需25分钟即可完成细胞凋亡检测。

2、本试剂盒提供了固定液，染色液，及抗荧光淬灭封片液。

3、对贴壁细胞，悬浮细胞和组织切片均适用。

4、足够检测100个样品。

包装清单：

固定液 50 ml

Hoechst 33258染色液 50 ml

抗荧光淬灭封片液 5 ml

说明书 1 份

保存条件：4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。本试剂盒自订购之日起六个月内有效。

注意事项：1、需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。

2、需PBS或0.9%NaCl溶液。

3、需盖玻片与载玻片。

4、荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。

5、在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。

使用说明：

1.贴壁细胞

A.取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。

B.刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。

C.去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。

D.加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。

E.用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。

F.滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，切勿弄反。

G.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长在350nm左右，发射波长在460nm左右，详细图谱请参考下图。

2.悬浮细胞

A.离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。

B.离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。洗涤期间手动晃动。

C.最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。

D.稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。

E.均匀滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。

F.用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。

G.滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。

H.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长在350nm左右，发射波长在460nm左右，详细图谱请参考下图。

3.组织切片

A.对于任何常见切片，处理至常规可以进行免疫染色时，或完成常规的免疫染色后，即可进行后续的Hoechst染色。

B.PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。可在六孔板中操作。

C.加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动。

D.用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。

E.将切片置于载玻片上，滴一滴抗淬灭封片液，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。

F.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长在350nm左右，发射波长在460nm左右，详细图谱请参考下图。

Hoechst 33258的吸收光谱和发射光谱，左侧峰为吸收光谱，右侧峰为发射光谱。

细胞爬片后，用Hoechest染色，需要固定吗

littlesilly：对于爬片的细胞，用HE染色前，一定需要进行固定吗？有的文献说用paraformaldehyde固定，有的没用。请教大家，固定必须吗？目的是什么？另外有几种固定的方法？

shanghainese：HE 是苏木素-伊红染色，一种常规染色，而非荧光染色，当然伊红也会产生荧光。爬片HE染色前应该固定，否则细胞会自溶，染色不好。paraformaldehyde固定当然好，也可用10%福尔马林。其它固定液也行，根据你的实验而定。

littlesilly：我指的是Hoechst荧光染色，不好意思。

shanghainese：这个我做的比较多，具体的方法您可以看一下，我综合了一些外文文献报道和国内文献报道做的。参考文献：Zofia Maciorowski,undefined Jozo Delic,1 Eliane Padoy ，et al。Comparative analysis of apoptosis measured by Hoechst and flow cytometry in non-Hodgkin's lymphomas

我做的方法（我已经发表了的论文中摘的）：

细胞爬片分别用1mg•ml-1 Hoechest 33342 2µl，室温作用10分钟，荧光显微镜下观察并计数凋亡指数（apoptotic index：percentage of apoptotic cells）。每个样本随机观察4个视野进行计数。计数1000个细胞，凋亡指数＝凋亡细胞数/1000 ×100％。凋亡指数取前后2次计数的平均值。实验重复3次。

Hoechst的封片问题

yebei791207: 我是要把24孔板的细胞进行荧光染色。镜下观察时，直接观察与封片观察有什么区别？防荧光淬灭封片液是什么概念啊？一定要用吗？

sunandsuny:如果你是观察及时的的话，直接观察与封片观察没有区别，如果想放置不能及时看的话，肯定要封片，不然片子不是干了吗？就是封片了也要放在湿盒中；防荧光淬灭封片液只是能延缓荧光素的淬灭作用，同样，如果不需要放置长时间的话也不需要用的，但是就是用了防荧光淬灭封片液也要最好及时观察。

caspase8428: 既然Hoechst荧光显色后不能再显色，那封片有什么意义啊？我是要看培养板里的细胞，是不是可以直接在板里固定加药，直接把板放在显微镜下看啊？

drake015: 如果有倒置显微镜，完全可以！

caspase8428: 用Hoechst染色后，PBS冲洗后就可以镜下观察了吗？封片是不是为了长久保存，以后还可以再看？封片液的组成是什么？是不是就是所谓的防荧光退色固片介质？具体怎样配制？

tangchy :Hoechst可加入培养基中对培养的细胞直接进行染色也可对固定后的细胞进行染色。前种情况需固定后再观察，后者PBS 洗后可直接观察。封片是让长有细胞的圆形波片（用24孔板或12孔板培养细胞，孔中置圆形波片）粘在 载波片上便于观察，同时也能保存标本（非荧光物质染色的标本），Hoechst 染色的标本不能长期保存。我们用的保存液为60%~80%的甘油。实验过程中发现Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果。

Hochest/PI双染

astra: 请问用hoechst33258可以和PI进行双染可以么？查了很多实验手册，都是单染，由于没有经验，所以能不能麻烦你提供双染的实验流程？

midas: 当然可以。以下步骤供参考：

1、向细胞中加入用0.01MPBS溶解的Hoechst33342，终浓度为10μg/ml，37℃反应10min；

2、继续加入用0.01MPBS溶解的PI，使它的终浓度为10μg/ml，4℃反应20min；

3、直接加入4％多聚甲醛固定液，与培养液按1：3混合，固定细胞10min；

4、取出圆形载玻片，50％甘油封片。

suifeng: 但是现在看到的很多有关凋亡检测的文献中用的都是PI 的单一染色，好象用联合染色的还不太多，但参考书上也是推荐用联合染色的，不知道PI的单一染色观测培养细胞的凋亡是不是也够用啊？用什么明显的缺点吗？

midas:用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！

gy: PI会不会变性啊？我在作hochest33342.PI双染时细胞全是蓝色的一个红色的都没有。我用的hochest33342浓度10ug/ml.pi 27.5ug/ml细胞用的是k562

midas:两个原因：

1、您的细胞的确没有坏死；2、如果您的紫外光光谱比较窄，用绿光激发看看。

linger: 为什么我在作hochest33342.PI双染时细胞全是红色的,一个蓝色的都没有?荧光显微镜有什么要求呀?我的细胞是用95％的酒精固定20分钟，PBS洗两遍，hochest33258(100ug/ml)染10分钟，然后PI（100ug/ml）染20分钟，50％甘油封片。至于荧光显微镜的激发波长，我还不是很清楚，

midas: 哈哈，反了！应该先染色，后固定！hochest33258对活细胞的损伤稍大一些，最好用hochest33342。终浓度用10ug/ml就可以了！激发波长：hochest用紫外激发；PI用绿光激发！

linger:您曾经发过一张帖子写到“hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！

这么说来，如果您用hoechst和PI做对活细胞进行双标，那么就最好选择hoechst33342，这是就可以直接将染料加入培养液中，之后固定观察；但是如果一定要用hoechsts33258，那么就最好是：固定－－>染色－－>观察”。由于当时我只订到了hoechsts33258，所以我就参考了你的帖子。那我再试试先染色后固定吧。还有一个问题，hoechsts染色以后是直接加PI还是用PBS洗一下再加PI？

midas: 直接加入PI即可！

其他

jchenone :请问hoechsts33258和hoechst33342有什么不同？是不是33342主要用于悬浮细胞，而hoechst33258主要用于贴壁细胞？如果我用hoechst33258和PI做双标，应该怎么办特别是 细胞怎么处理？

midas：hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！

这么说来，如果您用hoechst和PI做对活细胞进行双标，那么就最好选择hoechst33342，这是就可以直接将染料加入培养液中，之后固定观察；但是如果一定要用hoechsts33258，那么就最好是：固定－－>染色－－>观察。

三国孔明：我在做细胞凋亡，其中一个指标就是hoechst染色，可是几次染的效果都不好，大家能不能提点建议和注意事项什么的啊？我看好多文献上都说要用细胞爬片，我一直用的是细胞涂片，不知道这个对结果有没有什么影响啊？？

yeliangemail: 我做的是细胞爬片，觉得这个比较的简单啊，照着书上的做就行了。你可以换细胞爬片试试。注意调好荧光显微镜，我用的荧光显微镜是带摄像的，我一般用400倍，408nm采样。

sunwinter: 偶用hoechst染色时，至少染色30分钟以上。染色20分钟也可以观察，但是效果觉得不如时间长些的好

liotarry：

1、离心细胞，转速1000rpm

2、pbs洗1－2次

3、甲醇 冰乙酸固定15min（同时把hoechst 33258或者其他的燃料搅拌一会）

4、滴细胞于波片上！干后 加染液 （避光）

5、半个小时左右，pbs洗三次！

6、封片！ 4度可放几个月！

细胞涂片没有问题！注意细胞数量，不要太多也不要太少！

封片液：邻苯二甲酸二丁酸10ml ，聚苯乙烯25%，二甲苯70 ml,PH5.5

参谋长：hoechst33258染色好象做的不多，所以也很难找到成熟的方法。

shifang99：师兄有做过，用的好像是北京的什么碧云天的，不过好像不太好，有几次就直接没有染出来。他是做细胞凋亡的。后来用的SIGMA的HOECHEST33324，效果不错。

marley_cn：细胞涂片，4% 多聚甲醛固定15分钟，PBS洗一次，加Hoechest 33258荧光染料37℃孵育15分钟，于荧光显微镜下观察。凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。操作比较容易的。

heartbeyond：我的操作过程如下：

1、将Hoechst粉末25mg溶于2.5ml去离子水，得到Hoechst溶液10ug/ul

2、取10ml DMEM培养液，加入配好的上述Hoechst液10ul, 这样得到的培养液中的Hoechst 的浓度为10ug/ml。

3、将带有染料的培养液，加入到培养器皿中（骨髓间充质细胞）30-60分钟

4、吸出带有燃料的培养液后，pbs洗细胞三遍，

5、荧光显微镜下观察（紫外线激发）

可是怎么也染不上，这是为什么？

icepiao：可能是激发光的问题，特定染料需要在特定的波长下来观察的。这个是hoechset的一些参数，你可以试试

Fluorochrome Excitation Emission Applicable Comment

Hoechst 33258  365（激发）  465（发射）  U（奥林派司光程）   AT range（应用）

Hoechst 33342  355（激发）  465（发射）  U（奥林派司光程）   AT range（应用）

heartbeyond：但是我们的荧光显微镜只能发出两种光，一种蓝色，一种绿色，我不知道是否包含上述激发光的纳米数

gzyuyu：This protocol is commonly used in stem cells (although can be used in any other celltype) to differentiate G1 from G0 cells in the cell cycle, and stains both DNA (Hoechst)and RNA (Pyronin).

Note: This requires a UV excitation source

1.With cells in culture, aspirate media if they are adherent. If floater cells, spin downand resuspend in new media.

2.[If cells are from an animal, then remove from animal, wash 1x with PBS, lyse redcells, wash 1x w/ PBS, and proceed, with cells at approximately1-2 million per mL in media (for mice, IMDM or RPMI w/ 5-10% FCS works well).

3.You MUST lyse before Hoechst addition. Lysing after you add Hoechst will ruinyour experiment.]3. Replace with fresh, warm media.

4.Add Hoechst 33342 dye – to a final concentration of 10 ug/mL (stock comes as 10mg/ml, which is 10ug/uL, so adding 1ul for every 1mL of media is the easiest way).

5.Incubate at 37 degrees Celcius for 45 minutes.

6.Either remove media and trypsinize then wash for adherent cells, or spin down and wash 1x w/ media for floater cells.

7.If staining for extracellular markers (i.e.: Sca-1, Lineage, c-kit, etc) then resuspend cells in 300mL of PBS, and stain cells on ice in dark for 30 minutes with antibodies. (N.B.: You can not use a PE antibody, as Pyronin Y fluorescence is in this channel, and you can not use a UV antibody, as Hoechst is in this channel.)

8.After staining, or if just spun down w/o staining, resuspend in 2mL of 5% paraformaldehyde.

9.Samples must sit at least overnight in 5% PFA in fridge, can sit for 1-2 weeks fine too.

10.When you want to add PY, make 1:100 dilution then add 10uL to each mL PFA (so, final dilution is 1:1000 from stock – but for some reason, it looks better if dilution is done in this stepwise fashion rather than dye added directly to cells from stock!)

11.Put tube in fridge for 30 minutes to incubate w/ PY.

12.Spin down, resuspend cells in 500mL 5% PFA, analyze.

13.When analyzing, remember that antibody fluorescence is log scale, PY fluorescence and Hoechst fluorescence are linear scale.

JianH：荧光显微镜可以配备有三种荧光：blue，green，UV。Hoechest只能用UV.

icepiao：Hoechst染色好像就是很浅，我曾用来检测过支原体，不知道你当时又没有固定细胞。

heartbeyond：我没有固定细胞，因为我要得到的是活的细胞，文章上看到的改种染色，颜色不是很浅，可是我的染色结果不是浅的问题，是踪影皆无，新买了染色剂，还是不行。会不会是荧光显微镜的问题

shifang99：我的方法和你差不多，但是染的效果很好，细胞核看得很明显的，而且半个月后，还是很清楚的。估计可能是你的显微镜的问题。我用的好象是蓝光啊。你再看看。你可以看看有没有其他的荧光标记物，染一下，做个对照检查一下。

wnwnwang：我也请教一个问题，由于我要到别的地方观察，我不想消化细胞后进行染色，而是直接在六孔板里进行染色，pbs洗，然后观察计数。不知道这样对贴壁的细胞而言，染色是否会不够充分，效果如何？

altbenair：第一次做检测凋亡，也不知道凋亡细胞应该是什么样的，而且我们的条件差，手工拍照。我们的荧光显微镜只有三种激发光颜色 不能调激发光波长。说明书是这样写的：透镜转盘位置，激发光颜色，适用荧光素。WB 蓝 FITC(绿色荧光)   WG 绿 TRITC（红色荧光）  WU 紫外 自发荧光

用WB WG 只有少数发绿色 和红色荧光的地方，用WU 可以清楚看到很多细胞 。   

drake015：细胞核基本正常，属于正常细胞核，光线太亮。

照碧云天hoechst染出来的说法，只要核染出来比正常核小，而且亮度高就是凋亡细胞。他们的技术人员都在国外，没人能够提供详细的解释。都是染核的染料，结果应该差不多，不过一般我们作不出那么典型的图片。可是你那张图也实在不太象细胞核。

belgern: 观察药物诱导肿瘤细胞的凋亡，仅只做光镜和荧光显微镜能说明问题吗？用Hoechst33258染色检测培养的细胞凋亡的具体方法是怎样的？涂片的载波片需特殊处理吗？

drake015: 最好再加一种流式计数或其他的方法。形态学加定量比较理想

belgern: 但如果我不想做细胞爬片，选择hoechst33342染色（因hoechst33342可以对活细胞直接进行染色），能否直接将染料加入培养液中，染色10min，弃培养液和染料，4%福尔马林4℃固定10min,弃固定液,直接将培养瓶放在倒置的荧光显微镜下观察呢?

drake015:呵呵，思路这么清楚摸索一遍有何妨？祝你成功！33258也可染活细胞的，我做过，33342没用过。有倒置显微镜我想可以直接染色。不过为什么不倒掉培养液再染？染料是固体？我想还是现配成溶液比较好。不管怎么说试验不难，可以试试看。

非关凋亡的讨论

future04：实验需要标记干细胞，有人说可以用Hoechst标记，可是我查的大部分使用来标记凋亡的，究竟Hoechest可以标记细胞吗？能维持多久？

dp：最好别用他来标记移植细胞,体内虽然可维持很长时间,但后期的污染现象(染周围的细胞)特别严重,根本无法分析你的结果.切记!我实验失败的严重教训.

cardiohong: 我的研究方向是干细胞移植，现在实验已经完成。主要是在体外将移植细胞以hoechst33342染色，而后植入体内。2周后取标本复查，荧光很好，而且非常密集；但4周后再检查的时候，荧光却踪影全无。我对这种现象很难解释。可能的原因不外乎：1、细胞死亡，2、细胞排出染料，3、染料荧光自然衰减，或发生猝灭。但查了查有关资料，一直没查到hoechst33342的荧光寿命，以及在什么条件下会猝灭。

midas: cardiohong 我对您的问题谈一些我的看法（个人观点，欢迎讨论），

首先我对细胞（包括干细胞）移植后的存活问题始终存有疑虑：且不说移植后的免疫排斥问题，我们谈谈细胞的外部生存条件：培养细胞在体外有充足的营养供应，有它适合生存的培养基及介质，然而到了体内它周围有什么？条件自然比体外要差的多。所以我认为不解决移植细胞在体内的存活问题，那么移植的可靠性和实用性就会大大折扣！

我曾经用绿色荧光蛋白（一种标记细胞浆的荧光染料）标记嗅鞘细胞（体外观察很好），但是把它移植到正常的脊髓中，confocol结果发现一堆绿色的乱七八糟的小渣子，根本没有细胞的形态，但是用hoechst33342标记的，仍然有不少表面上显示正常的核的结构。从这一点上我们可以得出－－这时细胞的状态并不正常！虽然它们的核仍然完整。

下来谈谈hoechst的问题，hoechst是一种核酸特异性染料，与A－T键优先结合。因此在正常情况下hoechst荧光寿命的时间应该是较长的，直到A－T键被破坏。所以说荧光消失的问题就很可能是细胞死亡后，被周围的巨噬细胞吞噬消化掉的结果（如果没有完全消化，就仍然有荧光的显示）。

BlueSadNess: 首先Hoechst 33342 effulx是什么意思？是Hoechst 33342 拒染吗？

还有为什么干细胞（至少精原干细胞）会表现Hoechst 33342 efflux的特性？其原理是什么？

qjzhou2000: 不是拒染，而是能将染料泵出，所以在过流式的时候绘出现side-population的现象。至于具体原因还未明确，不过有些文章可以参考！

The ABC transporter Bcrp1/ABCG2 is expressed in a wide variety of stem cells and is a molecular determinant of the side-population phenotype