细胞培养过程中，发现贴壁细胞表面沾了很多死细胞，传代过程中一直存在怎么破？

胰酶消化一下细胞，然后等细胞贴壁后。尽早换液。一般你说的这种是细胞扎堆生长，顶上的细胞容易死

用 PBS 洗两遍之后，加胰酶进去，晃一晃，迅速将胰酶倒出，再用 PBS 洗一下，再加胰酶正常消化。死细胞由于粘附能力很弱，第一次加胰酶进去以后会掉下来，第二次加胰酶下来的细胞才是活性比较强的细胞。整完一次之后，再次传代方法同上，一般 2～3 次之后，细胞就完好如初了。

建议最近一次传代传稀一点，然后换几次液不要传代，降低离心速度看看是否改善

细胞逐渐死亡的可能的原因有：

培养箱内无CO2；培养箱内温度波动太大；细胞冻存或复苏过程中损伤；培养液渗透压不正确；培养液种有毒代谢产物堆积等