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细胞传代过程中的问题?

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浪子在天涯

1.贴壁细胞传代后细胞不贴壁,除了胰蛋白酶消化过度或者EDTA没清洗干净之外,还有没有其他原因能引起?

2.悬浮细胞传代培养时,收集的细胞重悬后有大量悬浮细胞报团生长,是培养基的问题还是其他问题?

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4 个回答

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我也是锦鲤ye

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1、缺少贴壁因子;支原体或细菌的污染;培养液配置、储存不当;复苏的细胞本身状态不好,已经老化,失去贴附性,接种细胞数目太少等。

2、细胞活力低;吹打过于剧烈,造成细胞损伤;培养基选择不恰当等等。

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浅陌NPKT

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1.贴壁细胞不贴壁:说明细胞状态不行了,可能是细胞老化了,可能有支原体污染(可加支原体清除剂);也可能是操作不当:胰酶消化过度;用力吹打细胞,造成机械损伤;离心转速过大,离心时间过长;再看看培养箱的温度湿度二氧化碳浓度是否合适

2.悬浮细胞抱团生长:如果是刚传代就有很多是抱团的,说明你传代时没有吹打均匀,多吹打吹打就好了;如果是培养了一段时间抱团生长的,很正常,因为有些悬浮细胞就是更偏向于抱团生长的。

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bamboopiggy

有帮助

可能是细胞senescence了,但是不会那么多,如果很多都不贴壁的话,还是考虑胰酶消化过了,或是胰酶消化不足,为了吹打下来,造成的机械损伤。至于悬浮细胞,有些细胞的特性就是抱团生长,你直接吹打开就好

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Eason老歌迷

有帮助

第一个问题:

也有可能是支原体污染,或者是培养基pH值过碱化,或者是你没有掌握好传代的时机,细胞老化了;还有就是可能接种细胞起始浓度太低了。

第二个问题:

首先你打错字了,你想表达的可能是抱团生长是吧。

抱团生长有很多原因啊。细胞离心速度过大或时间太长。你消化不完全的时候,细胞和细胞之间的连接没有分开。你的细胞老化了。或者是你传代的时候没有吹打均匀,细胞团过多等等

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