关于细胞培养消化时间问题？

注意观察啊，肉眼都可以观察到的啊，大概到80%都detach的时候，加培养基终止消化，那样你就不会损失太多细胞，保证了大部分细胞都可以被吹打。

消化时间要根据每种细胞的特性去摸索一下。用原浓度的胰酶消化对细胞损伤大，建议将0.25%胰酶用灭菌的PBS稀释一半再去消化细胞，这样细胞不容易消化过，对细胞损伤小。

加入胰酶后，在镜下观察，如果细胞开始变圆了，就立刻加培养基中止反应

消化中途可以多拿几次出来镜下观察状态，有大部分飘起来了就可以通过晃动摇下来剩下的。

消化时间和细胞类型、消化液的消化能力、细胞的密度等多种因素有关。一般养一种新的细胞要摸索一下消化时间，掌握细胞消化到什么程度恰到好处。消化的时间不能一概而伦，要看你的细胞的种类，即使同一种细胞，在不同的细胞株也回出现消化的时间不同的现象。

使用不同胰酶及其他试剂的消化时间相差较大,不强行要求消化时间，20s-10min均有，总体以细胞收缩相互分离并可以轻轻吹下为准终止消化。

若无法准确掌控胰酶作用时间，建议按照下述操作：胰酶首先复温到室温后加入细胞，然后每隔20-30秒，即吹打下细胞，如果能够吹打散细胞，加入完全培养基终止消化，如果30秒吹打不下，再等30秒重复操作。

消化时间: 其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可