细胞不贴壁，怀疑是血清的问题，更换血清后，效果依然不好，还可能是什么原因导致的？

细胞不贴壁有很多种原因导致的，你可以从多个角度来看。比如说是不是胰蛋白酶消化过多啊？是不是存在细胞污染，比如说支原体污染啊。或者你的培养基的问题，培养基pH值过碱；还有接种细胞起始浓度太低或太高啊。等等都可能引起

你胰酶消化时间是不是有点长？细胞状态差？

1、细胞的传代最重要的是胰酶处理时间：消化不够细胞本身就是成团的；若胰酶处理太久，容易造成细胞膜蛋白损伤，使细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。

2、缺少贴壁因子：血清中含有促贴壁因子，而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子，细胞的贴壁效果会下降很多。

3、支原体或细菌的污染。

4、培养液配置、储存不当，如pH值过碱，Gln量太少等原因。

5、复苏的细胞本身状态不好，已经老化，失去贴附性。

6、接种细胞数目太少，无法分泌足够的细胞外基质。

7、复苏时处理速度太慢，复苏过程不当。

细胞不贴壁主要原因是细胞活力比较差，如果通过消化后收集的细胞，很可能是消化时间过头了，影响了细胞的活力。