培养的细胞为什么总是一言不合就抱团，吹打之后也还是会这样?有什么很好的办法解决这一问题吗

引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差,且在吹打细胞的时候,那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损,所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性,让细胞保持较好的生长状态。

hepG2细胞就是爱抱团，你可以适当延长胰酶消化时间，在皿外混匀，直接加入皿里，别想在皿里晃开

细胞为啥总是喜欢抱团？

1，细胞死亡释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团（消化的过程可能过于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太强或有毒性等）。

2，细胞离心速度过大或时间太长。

3，消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难！

4，状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态）。

5，传代后细胞铺板不均匀。

如何避免细胞抱团？

1，用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。

2，对于贴壁非常牢固的细胞（如MDCK），为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，建议分多批多次消化，这样才能最大限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够最优。

3，细胞生长密度不要太高，70%－80％就好（细胞刚刚基本成单层细胞，没有出现成层生长），这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落，可先将细胞低密度传代，第二天再消化传代，这样连续传三次，细胞抱团的就越来越小，这样几代过后，再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。

4，消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶，这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个（因为细胞没有受力点了，所以细胞很难分散开）。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，严格控制好消化程度。

细胞抱团了，要如何处理？

1，如果细胞抱团不影响生长就没问题，只是计数的时候要麻烦点了。在消化的时候在细胞由多角形变成圆型之前，就用手轻磕培养瓶的侧壁，使细胞从壁上脱落，就可以了！——最好不要吹打，对细胞性状和生长都不好。

2，如果感觉有死细胞的DNA，在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞，防止对细胞膜造成物理损伤。

3，如果细胞抱团是肉眼可见的，那就让细胞静置半分钟左右，然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见，那可能没有特别好的分离方法，只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。

细胞抱团了，要如何处理？

1，如果细胞抱团不影响生长就没问题，只是计数的时候要麻烦点了。在消化的时候在细胞由多角形变成圆型之前，就用手轻磕培养瓶的侧壁，使细胞从壁上脱落，就可以了！——最好不要吹打，对细胞性状和生长都不好。

2，如果感觉有死细胞的DNA，在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞，防止对细胞膜造成物理损伤。

3，如果细胞抱团是肉眼可见的，那就让细胞静置半分钟左右，然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见，那可能没有特别好的分离方法，只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。

用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。

对于贴壁非常牢固的细胞（如MDCK），为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，建议分多批多次消化，这样才能最大限度地降低胰酶对细胞的损伤，保证细胞的状态能够最优。

细胞生长密度不要太高，70%－80％就好（细胞刚刚基本成单层细胞，没有出现成层生长），这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落，可先将细胞低密度传代，第二天再消化传代，这样连续传三次，细胞抱团就会越来越小，这样几代过后，再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。

消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶，这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个（因为细胞没有受力点了，所以细胞很难分散开）。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，严格控制好消化程度。