HUVEC 复苏后，传到三代以后整批污染？

可能的污染有支原体、衣原体和黑胶虫，出现黑胶虫，这种小黑点一样的东西是可以在局部范围内移动的，而且最开始不会影响细胞状态，长多了培养基变浑浊，细胞死亡。值得一提的是这三种污染都不能独立存在，必须有细胞参与，所以继续培养的无菌实验不能排除这三种的可能性。HUVEC既然是取原代细胞，很有可能会带有这样的污染，尤其是像衣原体和黑胶虫这样在细胞内寄生的污染。

那只能说明1.你冻存的时候可能就污染了 2.你的某个试剂污染，造成全体细胞污染

复苏三批都这样的话很可能是分装冻存前就出问题了或者使用的培养基灭菌没灭好,不太可能是无菌操作不过关的吧.

污染了的细胞先不要倒掉.分成2份,一份就这么放着,看看之后会不会长毛之类的,好根据菌落形状判断是什么污染.另一份加点广谱抗生素看看能否有效（主要看菌的抑制有没效果,细胞的话不太可能挽回了）.如果有效,那么另外复苏一批,在复苏后使用的培养基中加抗生素.如果没效,那可能就是真菌污染了,比较棘手的情况.可以用两性霉素B试试.但污染严重的话,大多数情况是需要重新复苏一批或者买细胞了.

你确定是细胞污染了？怎么确定的？

建议果断舍弃该污染细胞,将环境彻底消毒,因为霉菌的顽固可能会导致下几批细胞都会污染,所以,采用酒精彻底底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新洁尔灭擦洗一遍,把水盘里加上饱和量的硫酸铜。千万不可大意!