培养的细胞总是污染怎么办

细胞污染的主要原因包括：操作技术不严格、试剂质量不达标、大气中孢子计数增加、养箱或操作台使用和维护不当等。

因此，在细胞培养过程中，操作者不仅要严格遵守标准的操作程序，同时还要特别注意新产品、新品牌、以及设备的清洁维护。同时，及时检测并鉴定细胞是否被污染同样至关重要。

先看一下，和你同时养细胞的人，污染不污染，如果别人也污染。就是你们的环境问题，或者是共用器械的问题。如果别人不污染，就是你的操作问题

细菌污染、解决方法：仔细检查器具的灭菌情况，确保通风时间和高压灭菌器的压力是否足够。最重要的是，与培养基接触的移液管等物品如果被污染两次，则可能会导致储存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要检查培养基的浑浊度。此外，建议在培养基中添加抗生素

霉菌污染，解决方法：用硫酸铜溶液擦拭 CO2 培养箱，向托盘中加入饱和硫酸铜或消毒后加入饱和磷酸氢二钠高盐溶液，避免霉菌污染。

如果霉菌污染，暂时转移所有细胞，并立即彻底使用 guo 氧乙酸溶液擦拭培养箱，包括层板和内壁。将 guo 氧乙酸放在培养箱中一小时，使蒸汽扩散，待 guo 氧乙酸气味消散后，将细胞转移到培养箱中。值得注意的是，培养箱需要每两个月定期清洗一次，尤其是在梅雨季节。用 84 消毒液、清水和 75% 酒精连续擦拭培养箱，用紫外线照射也是一种有效的方法。

为防止霉菌污染，需添加 3μg/ml 两性霉素、霉素抑制素、fang 线菌素 D 或青霉素链霉素。一旦被污染，就不可能恢复，即使使用上述抗生素，也没有什么区别。对于支原体污染的细胞培养，最好选择是丢弃污染的培养物，并用使用新鲜的无支原体的储存液，彻底消毒环境。如果所有的细胞都被污染了，那可能是整个培养系统污染了。因此，必须对培养基和实验设备进行检查。如果只是个别污染，可能是操作问题，有必要注意实验操作步骤的规范。

支原体污染，解决方法：通常的过滤灭菌方法对支原体没有影响。细胞一旦被支原体污染，特别是对重要的细胞系，必须去除支原体，一般的方法有抗生素治疗、抗血清治疗和抗血清与补体联合治疗。值得注意的是，支原体最突出的结构特征是没有细胞壁。因此，它对作用于细胞壁的生物合成抗生素（如 β-内酰胺类、万古霉素等）完全不敏感，并且通常对多粘菌素、利福平和磺胺类药物具有耐药性。相反，四环素类和大环内酯类抗生素对支原体的抑制作用最强，而氨基糖苷类和氯霉素的抑制作用较弱

黑点污染，解决方法：黑点对细胞生长状态没有明显影响，细胞增殖后会自然消失，因此除了血清置换外，无需特殊处理。如果细胞可能被小的运动点污染，建议增加培养皿细胞密度，以提高细胞存活率。

真菌污染，解决方法：一旦被真菌污染，果断丢弃，然后对细胞房、CO2 培养箱、器皿和培养基进行彻底消毒。

原生物污染，解决方法：原生动物污染的原因有很多，如液体消毒问题、操作问题、环境问题等，如果细胞足够，果断丢弃被污染的细胞和复苏细胞。如果要保留，需要购买使用相关的灭菌试剂。