实验设备仪器，及其起步

提前准备细胞样品

试剂：多聚甲醛 70%甲醇 丙酮 PBS Triton BSA DAPI染液 DABCO Tris 甘油

仪器耗材：离心机 细胞培养箱 培养板 最重要的荧光显微镜

另外给你实验步骤：细胞爬片免疫荧光实验步骤

第一天：

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；

5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；

第二天：

6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5minx4次洗去多余的DAPI；8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

1、. 烘箱

2、培养箱

3.免疫荧光分析仪

4、水浴锅：

5、 冰箱

6、各种试剂

7、蒸汽消毒锅：

8、各种天平：台秤、精密电子分析天平，用于称量各类试剂。

9、液体体积的度量：量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯、锥形瓶等

10、pH计

11、高速离心机：

12、小型设备、用具： 定时器、滤膜、保鲜膜、防护眼镜鸭嘴镊;常规的玻璃或塑料器皿，包括平皿、试管、烧杯、量瓶、试剂分液漏斗、避光保存的试剂应使用棕色试剂瓶，如饱和酚、巯基乙醇等;记号笔、各种手套(PE、乳胶、家用、防酸的等)。

1. 细胞样品
2. 试剂、试剂盒： 多聚甲Quan；70% 甲醇；丙Tong；PBS；Triton ；BSA；DAPI 染液；DABCO；Tris；甘油
3. 仪器、耗材：免疫荧光分析仪、玻片