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丁香通

有关细胞冻存后 - 80℃保存的问题

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可靠的陶同志

背景:百度和高年级同学说冻存细胞短时间可以放到 - 80℃,时间上短的有说三个月的,长的有说半年的。但是我去年年底冻了一批细胞,因为实验室液氮罐空了,就放到 - 80℃保存了三周。上周我取了一管细胞复苏,发现细胞几乎全部不贴壁,24 小时后贴壁细胞只有几十个(25 培养瓶),且背景中出现了小黑点(见细胞培养过程中出现疑似细菌污染)。因为活细胞很少,所以完全没法控制污染,细胞被团灭。我用的冻存配方一直是 7FBS:2DMEM:1DMSO,18 年中冻完第二天放液氮保存的复苏基本都没事,同学有用 631 配方的也没问题。但是我们整个课题组放在 - 80℃冰箱里保存的细胞几乎没有人复苏成功过。

所以我有几个问题不明白:

1. 细胞 --RT 冻存盒到 - 80℃-- 冻存盒中取出保存到 - 80℃冰箱,为什么我的细胞就撑不住三周呢?

2. 如果在 - 80℃放了三周,放液氮,过几天再取出来复苏,还有救么?

3. 我发现液氮罐中的塑料盒底常出现一层厚冰。理论上液氮罐中应该是纯液氮,那么为什么取出来的盒子底下会有水冰(确信,我捏过冰球),甚至会冻住冻存管冻在盒子里拔不出来。

希望各位战友帮忙指点迷津,谢谢大家!

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4 个回答

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biopic

有帮助

老老实实按照标准操作,存液氮里面。就不会出这种问题。

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兽医冬冬

有帮助

我是兽医专业的,也会培养细胞,我们冻存细胞的流程一般是:收获的细胞放在细胞冻存盒里,4℃半个小时,-20℃两个小时,-80℃过夜,第二天早上放液氮。有时候也没有用细胞冻存盒,但基本没什么问题。希望可以帮到你!

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AryaTST3

有帮助

emmm,我师兄冻存的细胞过了有四个多月,之后贴壁生长大概花了三天才完全贴上,不过没有什么死亡的细胞。那个盒子会不会是拿出来的时候空气中的水汽凝结成冰了?

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Yoda1985

有帮助

1. 不同细胞在 - 80 度能存放的时间不一样,根据我的经验,皮实的细胞放半年复苏存活率也能有 80% 左右,娇贵的细胞即便 - 80 度过夜,隔天就放液氮,复苏存活率也可能只有 50%,所以别人细胞能放多久只能做个参考。

2. 答案参考问题 1 的,你的细胞能不能这么处理只有自己做预实验才能知道。

3. 这个可能是取细胞时时间太长,周围水汽凝结在你存放的盒子里,然后就积累下来了。

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