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科研学霸天团，48小时有问必答

问羊水细胞培养时，如何判断收获细胞的最佳时机？血性羊水如何处理？

科拜余萌

羊水细胞普通培养法1．一切操作均在严格无菌条件下进行，抽取羊水20～30ml，立即送往实验室。2．将穿刺所得羊水离心（1500r/min）5分钟，而后在接种箱内吸出上清液留其他检查用，将剩下的0.5ml沉淀在管底的羊水细胞轻轻打匀，分别接种在两个盛有培养液的无菌培养瓶内，充分混匀，放入37℃5%CO2培养箱。3．培养液有市售羊水培养液、张氏培养液或自制的F10培养液，L-谷氨酰胺，加小牛血清双抗，

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问外周血淋巴细胞染色体实验中，分裂相极少的原因？

bamboopiggy

不是试剂的问题，就是淋巴细胞收集的问题，淋巴细胞的量要够

4 回答173 围观

问关于细胞传代培养的细胞问题？

墨尔本

如果有仪器和试剂的话其实用AOPI进行染色会更直观，死的是红色，活的是绿色。

6 回答179 围观

问请问悬浮细胞如何做transwell测细胞迁移能力，具体步骤？按照正常贴壁的做过几次，上室种2万了细胞，染色没有细胞。

bamboopiggy

悬浮细胞穿过膜后会直接掉入下室，移除上室，用倒置显微镜观察可直接计数，在高倍镜下随机选取5个视野进行计数，最后计算平均值。或者收集下室培养液，用流式细胞仪计数

4 回答2266 围观

问使用胰蛋白酶加入EDTA是为什么?

dxy_nkqusvl2

EDTA是一种可以螯合Mg2+、Ca2+的螯合剂，细胞表面很多结合蛋白都带有这个Ca2+，因为Ca2+的作用细胞之间还有细胞与培养瓶之间才能连接，所以加入EDTA能有效率的将细胞从培养瓶上消化下来。

6 回答1966 围观

问制备小鼠胸腺细胞悬液时，加入1 ％伊红-Y 染液后，为什么有时候细胞死亡过多？

Eason老歌迷

大多数情况都是你的样本质量有问题，如果是培养的细胞，一般都是培养时间过长，或者是因为你的实验手段导致细胞死亡。

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问细胞冻存后，复苏效果有时不太好？还有，细胞有时候有黑点？

bamboopiggy

遵循慢冻速溶，放液氮保存，一般没问题，细胞有小黑点可能是血清不好，换一下血清

6 回答145 围观

问用lipo2000转染细胞是否需要换液，提取蛋白转染时间24h够吗？需不需要培养48-72h？

bamboopiggy

lipo2000毒性大，需要换液，提蛋白最好48h以后

3 回答261 围观

问细胞培养过程中，总是不容易贴壁，怎么弄呢

大草原的小灰驴

6 回答79 围观

问请问悬浮细胞如果做transwell 测细胞的迁移能力？如果按照贴壁细胞的做法，悬浮细胞会附着在小室下层膜么，会不会直接掉落？

府宅

会掉落，也会附着。由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系，有时细胞在穿过膜后不能附着在膜上，而是掉进下室

3 回答530 围观

问血管内皮细胞在培养的时候一般都用什么培养基呢？

dxy_gwrp7ndq

可以用cascade biologics的Medium 200培养基

5 回答104 围观

问如图，培养皿培养12h出来的，是什么东西？

bamboopiggy

感觉很漂亮的一个菌，这皿细胞别要了

3 回答145 围观

问用胰蛋白酶分离皮肤后，从真皮层刮取表皮细胞时，角质形成细胞培养中有很多间质细胞，怎么去除污染？

Eason老歌迷

将皮肤活检材料置于聚维酮碘( Betadine）消毒液中30分钟，或者用适当加大浓度的青霉素和链霉素处理以防止污染。

3 回答183 围观

问观察变移上皮时，用高倍镜观察的时候，基底层、中层细胞及表层细胞分界不明显怎么办？

师医生说

移形上皮细胞一般属于鳞柱交界，表层细胞呈立方形或椭圆形，体积较大，中层细胞为多边形，基底层细胞多为矮柱状或立方形。另外，在染色后是需要观察，细胞边缘的着色和厚度的。中层细胞多着色不均匀，基底层细胞染色最深，而且是边缘较厚！表层细胞多层裙边样。

3 回答145 围观

问细胞进行解冻或传代后细胞的附着力偏低

bamboopiggy

可能细胞本身就是个半贴壁的细胞，如果不影响实验就这么用，如果影响实验，就用促贴壁试剂，预先处理皿底

3 回答109 围观

问为什么细胞解冻后缺少活力，活细胞占比较低？

Topmicro

可能的原因有1.冻存方法不合适，包括冻存条件和冻存液；2.冻存后长时间未复苏；3.解冻方法不合适。4.细胞本身原因。

4 回答332 围观

问请问细胞传代最佳密度多少

dxy_gwrp7ndq

取决于什么样的细胞了，娇贵点的、难养的除了条件控制好外，密度在1-2x105/ml为宜，一般情况下5X104至8X105都没问题，具体看你实际培养经验去了，像肿瘤类细胞那真的挺随意的了，浓度别太离谱就行了，很好培养。在进行传代时，如果是悬浮细胞，只需简单稀释即可，若需完全更换培养液只需低速离心沉淀，再悬浮于合适的培养液中即可。传代密度太低，细胞容易死亡，表现出细胞在达到增长前有较长的滞留期

4 回答74 围观

问细胞太少涨不起来怎么办

美丽的天使GHX

多加点血清。2.有多加点同样细胞，3.加点那个细胞培养贵过的上清。

5 回答147 围观

问为什么细胞过密，状态就不好了

bamboopiggy

因为细胞不是单层了，夹在中间的细胞获得的营养物质减少。状态差

4 回答58 围观

问细胞培养密度太低少会死吗？求助

Keven轩

会的，因为细胞在增殖分裂的过程中会旁分泌一些促生长因子，如果细胞密度过低，无法产生这些因子导致细胞增殖更新变慢，导致衰老凋亡

6 回答137 围观

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