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科研学霸天团，48小时有问必答

问怎么才能鉴定质粒有没有被双酶切？

迟C迟

跑胶，用未酶切的质粒、单酶切的做参照，条带大小是否符合你的预期。

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问小提质粒的产物始终很低，可能是什么原因？

Keven轩

可以试试热洗脱冷结合，最后一步离心除去乙醇之后在60度金属浴上烘干5min让乙醇充分挥发，同时减少洗脱液的量

3 回答170 围观

问在用无水乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAC或NaCL至最终浓度达0.1-0.25MOL/L?

bamboopiggy

乙醇沉淀DNA需要盐离子,用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷,降低DNA分子间的斥力,才能沉淀完全.所以需要加NaAC或NaCL

3 回答469 围观

问为什么要用pH8的Tris水溶液饱和酚?

bamboopiggy

一、水饱和酚又叫水平衡酚。水饱和酚的PH小于7，一般是PH为5.0左右，通常与异硫氢酸胍一起使用，用于细胞RNA的提取，在酸性环境中，DNA在酚相，RNA在水相。两者就分开了。二、Tris饱和酚一般PH大于7.8，用于DNA的提取。其中，酚是强的蛋白变性剂，可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出。而Tris的主要作用是防治止酚类氧化，若酚类氧化，则会形成醌（两个苯环），醌含有强自由基，会破坏核酸结构

3 回答893 围观

问如果最有效的提高DNA提取的纯度？

bamboopiggy

1.细胞充分裂解 2 沉淀DNA时加足量甚至过量的异丙醇，3 ，用rna酶处理，去掉其中的rna。 4，晾干过程要充分。

3 回答188 围观

问怎么保存酚不被空气氧化？

小露娜i

加入巯基乙醇和8-羟基喹啉至终浓度为0.1%。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉末，不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制Dnase的活性。用Tris PH8.0水溶液饱和后的酚，最好分装在棕色小试剂瓶里，上面盖一层Tris水溶液或TE缓冲液，隔绝空气，也可以往瓶里充入氮气，防止与空气接触而被氧化。然后保存在4℃或-20℃冰箱中，可以保存几个月不会变色。

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问为什么不能用质粒DNA来提取基因组DNA？

未来9

基因组DNA的抽提，一般不会用到质粒抽提的试剂盒，原因是由于两者的原理完全不同

3 回答69 围观

问DNA纯化的目的是什么？

未来9

目的是回收得到纯的目的DNA片段,去除影响DNA连接酶活性的物质以及其它的DNA片段

3 回答279 围观

问基因组DNA提取使用试剂盒如何避免污染？

未来9

所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时

3 回答188 围观

问呈粉红色的酚可以使用吗?

bamboopiggy

不能用了，苯酚暴露在空气中被氧气氧化为醌而呈粉红色。所以还是再买一瓶吧

3 回答58 围观

问为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戌醇？

dxy_9n80neqq

在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容光焕发器数次，加入异戌醇能降低分子表面张力，减少在振荡时气泡的产生；配比一般是氯仿与异戌醇为24：1，也可以采用酚，抽提DNA去除蛋白质时，由于酚与氯仿是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带走。也可以在第二次抽提时，将酚与氯仿混合(1：1)使用

3 回答58 围观

问如何才能去提高DNA的提取率？

bamboopiggy

减少洗脱体积，增加洗脱次数。再就是裂解细胞要严格按照protocol来，别裂解过了，也别裂解的不够。

3 回答415 围观

问DNA提取洗脱体积太小，50ul会有什么影响？

Keven轩

回收的DNA浓度会比较高，但是量不多

4 回答58 围观

问为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液?

bamboopiggy

TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在TE中的稳定性较好,不易被破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液中保存.

3 回答150 围观

问在保存或抽提DNA过程中，需要哪种缓冲液？如果需要，哪种缓冲液比较好？

Keven轩

一般是用1X PBS磷酸盐缓冲液

3 回答60 围观

问为什么有时DNA提取量比较少？有没什么办法解决？

Keven轩

用个质量比较好的进口试剂盒就行

3 回答61 围观

问瞬转和稳转，提的DNA有区别吗？

Keven轩

提的DNA经PCR及琼脂糖凝胶电泳后没区别，都有目的基因的阳性条带。一般像构建细胞系用稳转，想快速获得大量目的基因表达产物用瞬转

3 回答1139 围观

问求助HepG2细胞培养基背景里面黑点及条状物是什么啊，有没有什么办法去除😭

bamboopiggy

这些小黑点是细胞自己分泌的，因为hepG2 有点挑血清，血清不好，它就会分泌一些物质，状态就稍微差点。

3 回答214 围观

问购买之细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形?

Keven轩

大多是因为在冻存以及复苏的时候，DMSO对细胞产生了毒性，导致细胞死亡，或者是低温导致细胞内液结冰产生冰晶损伤，建议使用全血清和DMSO作为冻存液，并且“慢冻快复”。而且刚复苏时离心转速可以高一些

3 回答117 围观

问大鼠原代施万细胞分离培养如何进行？

Eason老歌迷

目前最简便、快捷分离纯化施万细胞的方法是差速贴壁法，即根据不同细胞在培养器皿上贴壁速度的差异，去除成纤维等污染细胞，以获得高纯度施万细胞。细胞经0.125%胰蛋白酶消化后，制成单细胞悬液，置于未覆层的培养皿中，37℃,5%CO2孵箱中培养30min后，将未贴壁的细胞悬液转种于另－未包被的器皿中，30min后重复以上操作，最后将未贴壁细胞按照合适的密度接种在多聚赖氨酸或Laminin包被的培养器皿中

3 回答240 围观

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