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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
为什么HEK293T细胞在玻片上状态很差?
whilt-shirt
293细胞的贴壁性比较差,有可能是细胞老化,也有可能是培养基原因
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问
酶放大免疫实验技术中,请问放大指的是放大什么呢??? 是指显色,而使得实验结果便于观察吗?但是那荧光标记技术也可以叫做放大技术吗
迟C迟
在酶扩大免疫测定技术中,半抗原与酶结合成酶标半抗原,保留半抗原和酶的生物活性,当酶标半抗原与抗体结合后,半抗原分子上的酶蛋白与抗体密切接触,使酶的活性中心受到影响,酶的活性受到抑制。测定时标本中的半抗原、酶标半抗原与抗体竞争性结合,标本中的半抗原含量越高,加底物后其OD值越高。所以放大的是荧光信号。荧光标记技术并没有放大信号,所以不能叫放大技术。
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问
免疫荧光染色的单层细胞贴壁不牢
dxy_gwrp7ndq
1、包被时间不够,用明胶包被最好包被过夜(至少2h以上)。2、用于洗细胞的PBS温度太低。3、多聚甲醛是否恢复到常温。4、细胞密度太大
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问
96孔板,细胞洗板,枪头怎么不戳破细胞层,还能将培养液吸干
府宅
把细胞培养基靠一侧吸出来,尽量减少与板底部的接触,然后还要加pbs或者培养基洗2次,洗残余的药物(细胞未摄取的药物)
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问
免疫荧光中荧光信号无细胞形态是什么情况?
dxy_8y6odnaq
封闭时间不够或浓度不够都有可能 导致一些抗体非特异性吸附 另外在染色过程中需要保证湿润的环境 否则也会影响染色
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问
大家好,请问细胞的免疫荧光过程中,涉及到GFAP的染色,破膜的影响大吗?在抗体稀释液中是否添加triton以及合适的比例呢?
dxy_cnbwb4m9
破膜在IF中是必要的 你需要控制好时间和tritonx100浓度。一般protocol是室温10分钟0.5%浓度,你可以参考一下 然后适当降低时间和浓度 如果条件太剧烈就会看到细胞膜破洞
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问
免疫荧光染色背景过亮该如何改进?
府宅
封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合,减少背景染色。如果背景太强,可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间
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问
细胞复苏之后不贴壁
biu2266
复苏血清浓度要提高,细胞密度最好增加
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问
关于细胞冻存 DMSO 浓度
生物技术学生
冻存时细胞浓度是关键,要是细胞浓度过低,因为冻存后会有很多细胞死掉,所以要多一些细胞复苏时容易长起来,我们也样 G2 和 60,我们用的是纯血清或者完培加终浓度为 10% 的 DMSO 后,直接放到 - 80 冰箱里都可以复苏我的完陪 + 20%FBS+10%DMSO, 存活率和绝对活细胞量都很低,有的全死。冻存的细胞量和浓度都很大的
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问
保存细胞的细胞冻存管在使用之前需要灭菌吗?
赵小叶
冻存管没有开封之前应该都是无菌的哦 如果盖子开了就别用了吧 不能高压灭菌重复使用
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有关细胞冻存后 - 80℃保存的问题
兽医冬冬
我是兽医专业的,也会培养细胞,我们冻存细胞的流程一般是:收获的细胞放在细胞冻存盒里,4℃半个小时,-20℃两个小时,-80℃过夜,第二天早上放液氮。有时候也没有用细胞冻存盒,但基本没什么问题。希望可以帮到你!
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问
细胞冻存液是否对细胞贴壁有影响
好假哟00
不知道你复苏培养使用什么规格的瓶子,因为商品化冻存液中应该也有 DMSO,对细胞影响较大的也是这个成分。足量的稀释可以降低他的毒性。
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问
细胞冻存液污染了,细胞怎么办
Doctor高1
如果冻存液污染,那你冻存的细胞肯定也被污染了,只能丢弃,因为污染的细胞你花时间金钱去补救,结果都差强人意
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问
如何比较不同实验组蛋白的岩藻糖基化水平
dxyhsx123
可以做质谱啊,这个是目前比较多的,经费充足,质谱带你起飞。
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问
如何快速定位污染的方法?
丁香实验
靠近风口的位置,还有就是有水的地方永远是首要排除的位置。重点怀疑水浴锅和培养箱内的水盘是不是有细菌/霉菌滋生。还是要事先做好细胞实验室布局设计,优化和规范细胞操作流程,提前查缺补漏,才不至于发生污染后,无从下手找到原因。
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细胞培养背景发现移动的小点,是细胞污染?
SJ多可爱
有可能是细菌污染吧?后期培养液浑浊了吗?题主:没有浑浊,现在查了很多,还是怀疑黑胶虫污染,使用了黑胶虫清除剂好了很多 使用黑胶冲清除剂后期还能见到会动的小黑点吗? 题主:会少些,一旦停用就又会有 我养的时候,细胞密度长到接近百分之90的时候,就基本上很少见到黑点,不影响细胞状态,没啥问题,细胞增殖没有问题,形态也没有问题,不必太在意这个黑点的,我见过好多养细胞都有这种会动的黑点,细胞生长不受影响,
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细胞污染及解决方法
yj1984ren
这两张图到处都有了,结合楼主提到的细沙样,就要考虑细菌污染了。
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关于THP-1细胞培养问题(悬浮细胞自行贴壁)
丁香实验
我的thp-1前一段时间也出现了类似的问题,当时除了这种细胞,别的细胞状态也不太好。怀疑是污染了。纠结了很久,后来把那一批细胞都扔了,培养液的瓶子也换成了新的(实验室自己配的培养液,自己备瓶子装),复苏了新的细胞。现在thp-1细胞状态很好,背景干净,长的也很快。建议楼主有冻的细胞就复苏新的吧。状态好的时候多冻些——后面细胞状态可能是您手法问题(主要是血清问题最重要,您列的血清应没问题,要是黄色的
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磁珠分离时出现堵柱现象怎么办?
pppeachya
细胞悬液用 300 目滤网过滤一次,过柱前重悬细胞时再加大液体体积试试~
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问
CD25磁珠分选纯度很低的原因,如何处理?
莹啊免疫啊
可能是磁珠的特异性不够或者量不够,或者是你是两个一起分选的还是分步分选的,一起分选的话,CD4+本身可能就带了一些25+和25-导致结果不好?个人推荐可以试试流式分选,多重筛选还挺省事的。
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