提取乳鼠肝原代细胞

可以看看这篇文章讲的很详细：

《小鼠原代肝细胞提取之实操篇》,断颈处死,活力碘消毒,无菌取出肝脏,于无菌维持液中漂洗,用眼科剪仔细清除肝包膜,韧带,沿肝边缘剪切肝尖组织(绕开肝蒂等)转入青 霉素小瓶中,用眼科剪绞碎,剪成0.1-1.0mm3大小的碎片,加入5倍体积无菌维持液,用滴管轻轻吹打,吸出上层血细胞再用无菌维持液反复清洗3~5次,加入10倍体积无菌胰蛋白酶消化液,37℃消化,消化过程中不断震荡,至组织块边缘变薄(镜下观),离心 (1000rpm,10分钟)弃去上面酶液,用无菌维持液将组织块清洗2~3次,加入新鲜无菌胰蛋白酶消化液重复上述步骤.此时组织块边缘模糊,1000rpm离心10分钟,取沉淀即为消化下的细胞,重新用无菌维持液悬浮,离心,洗1~2次,用20%生长液悬浮即得细胞 悬液；将消化过的组织块重复消化5~6次至组织块消化完全,重复以上操作,合并几次所得细胞悬液,计数,调整细胞浓度为210 5 个 细胞/mL,将细胞悬液接种于塑料培养瓶中,置于37℃,5%CO2,饱和湿度培养箱中培养.培养48小时后,换新鲜配置的培养液培养5小时,可除去绝大部分血细胞及杂细胞,37℃,5%CO2,饱和湿度培养箱中培养,每隔3天换培养液,获 得单层肝细胞。

1、 4套剪刀镊子，高温高压灭菌（分别用于剪皮，开腹，剪断下腔静脉和剪下肝脏，肝脏剪碎）。
2、配置好的灌流液，消化液（一定要37℃预热！！！）。重悬过程中用的DMEM一定要预冷！！！
3、适龄小鼠
4、灌流泵调节好转速