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科研学霸天团，48小时有问必答

问如何用七氟烷处理细胞？

bamboopiggy

你这个可能要用到七氟烷挥发罐，用特殊的chamber将细胞养在里面。

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问seer数据库

Eason老歌迷

打开seer数据库，在SEER点击Selection, 选择Edit按钮，根据你自己的需要挑选患者资料，比如说我选择年龄为0-14岁、第一次诊断恶性肿瘤的，诊断时间为20071.1-2015.12.31，见下图。你可以选择做没做过肠镜检查的。

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问求助：SY5Y细胞培养问题

Eason老歌迷

用显微镜观察，看看游动不游动。不游动，它可能是细胞碎片，如果是游动的，就说明有细胞污染。我感觉你这个是传代时机不对，细胞老化，产生的碎片。

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问关于细胞复苏传代的问题

Eason老歌迷

细胞密集的地方，新生细胞没有办法找到贴壁点，细胞当然会飘起来。同时一些老化了的细胞贴壁能力有所下降，容易被竞争去贴壁的行列，从而飘起来。所以建议你传代的时候把细胞吹散均匀，不要有抱团的。另外就是及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长的过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了。

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问如何在linux系统中循环批量处理序列文件

Eason老歌迷

一、批量在文件某行插入内容： find -type f -name ~undefined.pcf" |xargs sed -i '/aaaa/abbb/' find -type f -name ~undefined.pcf" |xargs sed -i '/aaaa/ibbb/' 其中a表示在包含"aaaa"的行后面一行加入"bbbb";i表示在前面一行加入。二、批量替换文件内容： find -type f -n

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问MTT实验

Eason老歌迷

我也遇见过这样的情况,我在同步化24小时以后加药,分不同时间点,短时间点比如4小时,没有这样的情况,但12小时或24小时就出现变黑,有时是个别孔,有时是整个扳子,后来我缩短了同步化的时间,时间点也尽量缩短,就避免了这种现象。当时我的感觉是细胞长期处于无血清状态下已经死亡了。

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问96孔板铺板数量问题

伟点丽

细胞反复吹打对细胞活性也有一定的影响，单枪加平行孔之间会有偏差，可以用排枪加细胞悬液，保持平行孔的平行性

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问想请教一下：CCK-8需要避光的原因？

balalaLy

避免试剂中的有效成分降解，但也不需要很严格避光，只要不是灯光正对着照就行。

3 回答88 围观

问如何成功高效的富集聚糖和糖肽以完成糖蛋白分析？

Eason老歌迷

通常使用氨基或者酰胺基柱等极性基团小柱来进行富集。使用MonoSpin Amide可以富集酸性，中性和碱性化合物。通过使用MonoSpin形式整体硅胶小柱。

2 回答80 围观

问各位师姐师兄细胞传代冻存时间是怎样的？

申东熙老伯

冻存时间？意思是冻多久吗？如果是-80的话，细胞冻个一年第二年就不太行了，放在液氮可以放很久。

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问请问细胞长满一个T25瓶时，大概能铺几个6孔板，使每个6孔板的孔中达到合适的试验细胞密度？约每毫升10的5次方个细胞？

Eason老歌迷

一个T25的细胞瓶相当于6个培养板。铺6孔板得看接种密度和铺几块板，如接种密度为每毫升10的5次方，每孔加2毫升，一个25平方厘米的培养瓶可铺4块6孔板。

3 回答2081 围观

问原代神经元培养过程中聚团脱落是为何

balalaLy

有没有可能是多聚赖氨酸包不好？或者培养基ph不对影响细胞状态

3 回答94 围观

问过滤器膜是怎么选择的呢？

Eason老歌迷

首先要考虑化学相容性，即滤膜是否耐酸、碱、有机溶剂等。常用的微孔滤膜一般是圆片滤膜，比如25mm圆片微孔滤膜，可以配合针头滤器连接注射器使用。47mm圆片微孔滤膜，可以使用换膜滤器，布氏漏斗、压力容器等配合真空泵，

4 回答155 围观

问我细胞传代不需要离心，只需要吹打成细胞悬液之后弃去部分液体，补加培养液就可以，操作很简单我步骤都是对的但是为什么我细胞状态一直？

Eason老歌迷

可能有几个原因，一个是你的传代时机选的不好，容易细胞老化。二是你的培养基缺少某些成分，或者是ph值不对。或者是你的胰酶消化过度。

3 回答415 围观

问最近养细胞总是出现霉菌污染，换了培养基，重新复苏还是会有，大概是什么原因呢？

秋秋欣欣

环境有问题，孵箱以及培养房都灭菌

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问培养瓶是用密封盖好，还是用透气盖好？

Eason老歌迷

各有好处，其实都差不多。密封盖是一次成形不带内垫,常用于密闭培养,可保证其密闭性。透气盖的话，瓶盖带有0.2μm疏水滤膜,提供无菌气体交换,减少污染的风险.常用于开放培养,推荐用于CO2培养箱培养,尤其适用于需要长期培养的实验。

3 回答1598 围观

问细胞培养过程中出现碎片如何处理？

Eason老歌迷

我比较常用的几种方法一个是稀释法。细胞稀释后还能增殖，会越来越多，而细胞碎片相应地会越来越少。还有就是自然沉降法。将细胞悬液移到离心管中，等细胞大部分下沉时，可将上液吸弃，再加入培养液悬浮细胞，此方法可反复使用，同时每次可显微镜下观察是否符合你的要求。

3 回答179 围观

问复苏后应不应该立马去除掉DMSO?

Eason老歌迷

肯定的啊。细胞复苏后是需要立即离心去DMSO，这样可减少DMSO对细胞的损害，DMSO在常温下对细胞的毒性作用较大。

3 回答48 围观

问为什么将质粒转化到感受态细胞中，培养基培养后再提取质粒?

Eason老歌迷

细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。培养一段时间以后，质粒进去细胞，且增殖到一定数量。

3 回答273 围观

问原代神经元培养过程中聚团脱落是为何

Eason老歌迷

可能有多种原因：1.消化不完全，或消化时间不够，都会出现聚团的现象。2、有些细胞就是有相互聚集的特性，这个很难解释，即使吹打均匀，细胞在贴壁时候也还是会聚集在一起。你参考一下和你培养相同细胞的朋友，看看他们是否也是这种情况。3.接种密度过高，稍微降低密度试试。4.瓶子没洗干净。换洗的培养瓶试试。

3 回答307 围观

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