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科研学霸天团,48小时有问必答
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无缝克隆不长菌怎么办?救救孩子吧做了一个多月了
bamboopiggy
1.你是把pcr后的产物直接进行测序了?那只能说明你pcr没有问题,不能说明已经连接成功。除非是你连接以后的产物,跨接头pcr测序正确,才能说明已经成环。2.你构建的质粒确实有点大,你转化的时候,为什么不把连接产物全部转化了?而只加了2ul?建议你把连接产物全部加到50ul的感受态里面,进行转化。3.如果你长出菌落来,你可以考虑菌落pcr试试,如果跨接头测序正确,说明已经成环。
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问
求活菌计数方法,在不借助仪器的情况下?
bamboopiggy
你是说活菌克隆的计数方法吧?不是单个菌的计数方法,你可以直接用笔在平板上点点来计数。
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问
DNA和RNA核酸稳定性问题
迟C迟
qPCR实验中的DNA模板直接用ddH2O稀释就好了,不要用TE buffer,里面有盐离子,会影响PCR效率。
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问
96孔板做病毒滴度怎么处理数据 计算结果啊?小白求大神解答
bamboopiggy
MOI值=病毒滴度(TU/mL)×病毒体积(mL)/细胞个数在96孔板中铺1×10^4个细胞/孔,培养基定容至100μL/孔;依据所计算出的病毒体积,逐个孔添加慢病毒,并于感染次日更换新鲜培养基。a.带荧光标签的慢病毒:观察荧光感染后72小时后,于荧光显微镜下观察细胞状态和荧光情况,确定细胞状态较好且荧光数较多的孔,对应为较适宜的MOI值。b. 不带荧光标签的慢病毒:抗性筛选(puromycin/
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问
请问碱性尿素缓冲液如何配制,PH值应该为多少?
bamboopiggy
先配缓冲液:8.95g磷酸氢二钠,3.4g磷酸二氢钾溶于水,并定容至1000ml,然后再加入30g尿素,因为尿素缓冲液pH值为6.83.可以加NaOH调至7.0
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问
氟苯尼考粉和恩诺沙星粉用什么溶剂溶解
dxy_gwrp7ndq
可以使用二甲亚砜作为溶剂溶解。
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问
透射电镜,请问各位大神,我做的颗粒物,它不溶,现在要收集细胞做电镜,可是那个颗粒物怎么把它过滤掉呀?
Topmicro
颗粒物直径多大?可以选择合适孔径的尼龙网过滤,比如70微米或者120微米。
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问
中和抗体实验中加病毒对照的时间及原因。
Topmicro
加病毒对照的时间根据细胞类型确定,一般用处于生长相刚达到完全融合的细胞进行病毒滴定。
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问
ELISA板条相关问题?
未来9
1、应该用ELISA试验专用板子。细胞培养板是不行的。ELISA专用板条,是经过处理的,要求每孔的均一性要好;而细胞培养板同样经过处理,但是是为了细胞更好地贴壁生长,使用细胞培养板可能会造成孔与孔之间的显色没有可比性。所以,细胞培养板可以做要求不严格的定性ELISA实验,而其他情况,应当使用正规ELISA板条。2、细胞培养板用于定性或要求不是很高还可以清洗后重复利用;对于定量试剂最好用酶标板,可以
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问
银染致敏完直接显色了,显色了15分钟,还能重染吗
bamboopiggy
重新做吧,没法重新染,因为染色是a b液的反应,反应完了,就都结合了
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问
测空间沉降菌中平板菌落蔓延
天一湖医者
看下菌落轮廓,如果有明显界限,就分开计,没有的话算一个。
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问
传代细胞培养胰酶时间问题?
Topmicro
胰酶消化时间得根据你的细胞特点来定,一般控制在1-3分钟左右,你可以每隔一分钟吹打试一下。
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问
请问PEG的转化原理是什么?
bamboopiggy
PEG是细胞融合剂,可通过引起细胞膜表面电荷的紊乱,干扰细胞间的识别,从而有利于细胞间融合和外源DNA分子进入原生质体。
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问
加显色剂后“花板”的原因和解决办法
府宅
洗板次数不够或洗板浸泡时间过短也会因洗板不 浄造成“花板”
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问
严格厌氧菌怎么确定其量呢?平板计数么。
府宅
双歧杆菌等严格厌氧菌采用双层平板计数法
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问
高温能杀死大肠,为什么饼干烤好后,检测还有大肠?什么原因可以造成?又怎么可以完全制止大肠?
Topmicro
高温确实能够杀死大肠,饼干烤好后检测到的大肠多来自包装污染或包装中间过程的污染,做好包材、包装机和操作人员的消毒工作可以有效防止大肠杆菌污染。
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问
血凝实验对血凝效价表达方式以log表示时,如,病毒2倍倍比稀释时的HA效价为9log2,怎么理解这里的9log2呢?
Topmicro
病毒2倍倍比稀释时的HA效价为9log2,是用以2为底的负对数(-log2)表示,其效价为1:512。
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问
想问一下从PBMC中分离的NK细胞体外培养扩增发育的方法(除用工程细胞K562外)
天一湖医者
将 PBMCs 和偶联有 NKp46 单抗和 CD2 单抗的 Cloudz™ 凝胶微珠共同孵育,该步骤将激活 NK 细胞,进行扩增。
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问
菌液OD600 在0.6-0.8之间表明细菌处于log 生长期?
Topmicro
通常所说的菌液OD600=0.6-0.8是在紫外分光光度计使用10mm光程的时候测定的,如果使用酶标仪测定的话注意校正换算。
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问
CsCl密度梯度离心一定会自从密度梯度吗,配置两个浓度的CsCl用在同一个离心管里会不会互溶?
bamboopiggy
不会的,你加上层的CsCl的时候,帖壁加,应该就没有问题。
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