冰冻切片时组织如何用蔗糖脱水处理？

取新鲜组织于4%多聚甲醛固定24小时

2 30%蔗糖脱水48小时以上

3 -250C包埋（冰冻切片机内）

4 冰冻切片

冰冻切片步骤

1. 冰冻切片4um左右，室温25°C复温30min，浸入4°C预冷的丙酮固定10min，

2. PBS（PH为7.2-7.4）在9cm皿内摇床冲洗3次，每次5min（第一次冲洗时间短些，约1min后更换）

可直接高浓度蔗糖（25%~30%）直接脱水也可分步（10%-20%-30%）脱水。通常含水量丰富的组织为了得到更好的组织形态建议采用分步脱水的形式。

无论是否含固定成分，2~8℃低温脱水都是最为推荐的选择。

相比于速冻组织而言，脱水后的组织通常需要浸泡在oct中平衡一段时间再冷冻切片，防止切片过程剥脱。

除常规的蔗糖脱水法之外也有使用PEG等高分子脱水剂脱水包埋的方式。可直接衔接碳蜡包埋，相比于一般冰冻组织块保存更久。

如果要将固定和脱水同步进行，用甲醛液直接溶解蔗糖就可以了，也可以用4％多聚甲醛配制25－30％的蔗糖溶液。这样尤其适合冰冻切片的处理，达到了蔗糖脱水的目的