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科研学霸天团，48小时有问必答

问流式细胞的抗体，可以提前配好吗？

徐彩云6

可以提前一天配，最好不要超过48小时，同时必须按要求进行保存。另外为数据的准确性建议现配现用

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问小鼠mcao模型术后出现对侧前肢瘫痪，但ttc染色没有梗死灶

徐彩云6

TTC分析是造模成功的必要不充分条件，而行为学就难说了。

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问CRISPR cas9 敲除STING基因没有一个是成功的基因测序并没有突变是什么原因啊

汤姆卜丽波

可能是等位敲除了同样的碱基。碱基变化数目为3的倍数时，因无法造成移码突变，敲除可能会失败。需要碱基变化数目不为3的倍数，才可算成功

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问流失细胞术中使用了染料后开始分选后，无明显变化（应该有细胞分群）哪里出问题了

huarenqiang5

主要考虑：（1）抗体的特异性不好; （2）细胞问题；（3）前处理有问题；（4）仪器参数的设置。

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问流式细胞的数据处理：使用的软件是FlowJo，导入散点细胞不分群怎么办？

huarenqiang5

首先要排除试剂和细胞本身的有无问题

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问医院病理科蜡块，能保存多久？

徐彩云6

病人的病理切片及其组织腊块儿（可供继续切片的石蜡包埋固定的组织块儿）要保存最长可达20年才可以销毁。

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问不同时间点刺激细胞实验设计

毛利小五郎的徒弟

需要各个时间点都设置对照，在统计分析时是与各自时间点的对照进行比较。

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问大鼠心衰/心脏毒性模型，阿霉素。

毛利小五郎的徒弟

静脉注射倒也是个好办法，可以尝试

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问流式分选，阴性对照和阴性筛选有何不同？

毛利小五郎的徒弟

阴性对照：即不添加任何额外荧光染色的对照管。设置空白对照用以区分细胞本底的自发荧光及判断药物等外界处理是否会使细胞额外引入自发荧光。阴性筛选：通常指细胞发育过程中的分化筛选

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问请问，流式配色时，如何为难染色的分子，挑选出最合适最强的color？谢谢

huarenqiang5

流式细胞仪是同时检测多种荧光的，这些荧光之间可能存在干扰。我们需要根据流式细胞仪的通道，来确认有哪些荧光素可以选择，这样可以在后期搭配的时候，尽量避免干扰。在已确定 Marker 的强弱，和流式细胞仪可检测的荧光素的强弱后，我们要遵循「强弱搭配原则」，进行配色。强表达抗原 CD3，选择弱荧光素 FITC 或强荧光素 APC，对实验结果影响不大。弱表达的抗原

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问流式细胞术里试剂怎么稀释

huarenqiang5

BSA：牛血清白蛋白，浓度可以在一定范围内1%~5%。 TBS：Tris buffer saline。就是Tris的盐溶液，很常规的溶液，配方：20mM Tris-HCl（ph8.0），150mM NaCl。如果用生理盐水，对抗体来说是不利的，虽然在基础条件很差的情况下会用这个溶液，但是还不如PBS溶液。既然是做流式，按照正规程序操作抗体，得到的结果也最能反

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问流式的同型对照怎样选择？

huarenqiang5

一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体。比如抗人的CD56带FITC标记的抗体，抗体来源是MouselqG1，K链，那么它的同型对照就应该是FITC标记的MouselgG1K链。如果抗体是组合形式，如纯化的一抗+荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。比如CD86的纯化抗体，成分是MouselgG1k链，它的同型对照是纯化

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问MPTP亚急性模型建立，多久出现运动障碍呢？

毛利小五郎的徒弟

会出现的、得七天左右。按其注射剂量的不同，造模7d后小鼠中脑黑质部DA能神经元损耗40% (10mg/kg)至60% (20mg/kg) 不等，其纹状体 DA损耗40%至90%不等

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问小鼠肝脏切片分析

毛利小五郎的徒弟

看图片可能是血窦或者血管切面。

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问投稿Redox biology 与氧化应激无关可以吗？

huarenqiang5

这个杂志比较影响力很大，主要是接受氧化应激相关稿件，对文章的要求也很高，你如果想投可以试一下，过了是好事，如果不过再投别的杂志

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问求助：怎么提取细胞内糖原

huarenqiang5

糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。

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问SD大鼠做完股骨缺损后3天出现术区同侧眼睛发白

蓝莓小布丁

一只鼠还是多只鼠呢，眼睛的问题较为少见，需考虑是自身因素还是药物因素

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问求助小鼠抗生素灌胃

huarenqiang5

可以进行灌胃分析，一般最长可以灌四周

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问紧急求助！LPS冻干粉的储存

汤姆卜丽波

一般来说冻干粉常温放置没关系的，配成液之后就要4度了

3 回答118 围观

问想做特发性间质性肺炎动物模型，不知道如何做动物模型

汤姆卜丽波

可通过气管内注射博来霉素或鼻内给予二氧化硅建立特发性肺纤维化大鼠或小鼠模型，最快2-4周即可成模，有一篇综述叫特发性肺间质纤维化动物模型制作探讨，写的挺好的你可以参考一下

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