求教：请问有没有小鼠角膜铺片染血管的protocol 分享一下

以下是一份小鼠角膜铺片染血管的protocol，供参考：

材料：

小鼠角膜组织

PBS缓冲液

4% 多聚甲醛

Triton X-100

抗CD31或抗血管内皮细胞抗体

二抗

DAPI或其他核染色剂

荧光显微镜

步骤：

将小鼠去角膜后立即固定在4% 多聚甲醛中，4°C固定过夜。

用PBS缓冲液洗涤样品3次，每次5分钟。

在PBS缓冲液中用0.2% Triton X-100进行细胞膜破裂，30分钟。

洗涤样品3次，每次5分钟。

加入抗CD31或抗血管内皮细胞抗体，室温孵育2小时。

洗涤样品3次，每次5分钟。

加入荧光标记的二抗，室温孵育1小时。

洗涤样品3次，每次5分钟。

加入DAPI或其他核染色剂，室温孵育15分钟。

洗涤样品3次，每次5分钟。

将样品铺在载玻片上，用透明胶封口。

使用荧光显微镜观察和拍照。

需要注意的是，在实验中可能会出现一些问题。例如，如果细胞膜没有完全破裂，可能会导致抗体不能充分与细胞膜结合，从而导致染色效果不好。此外，抗体浓度和孵育时间也可能会影响染色效果。因此，需要根据实验条件进行适当的优化。

第一步：心脏灌流固定

小鼠麻醉后，仰卧位固定小鼠四肢, 剪开胸腔，充分暴露心脏，在心尖左旁2 mm处用输液针头刺入并剪开右心耳, 迅速灌注生理盐水100mL, 肝肠变白表明灌注成功, 旋转输液开关, 再灌入多聚甲醛溶液100 mL, 小鼠四肢抽动表明灌注固定液成功, 待抽动完全停止、全身组织器官变硬后摘取眼球，再用甲醛固定25 min。

第二步：角膜铺片

取出眼球置于载玻片上，用吸管滴一大滴生理盐水于眼球上保证眼球完全浸没于水滴中 眼科显微镊（带齿）夹住总腱环，用显微剪沿总腱环将角膜剪下，暴露并挤出晶状体（椭球状）；除去角膜、虹膜、晶状体用齿镊夹住视神经，无齿镊将视网膜挤出，展开呈碗状，滴一滴生理盐水在上面，以视盘为中心, 放射状切开4刀, 呈四叶草状，去除色素颗粒, 神经层向上展平,加数滴PBS, 轻轻漂洗干净。