荧光双标一抗不同来源，其中一个含量低，想分开敷，求操作？

我用的是大鼠脑组织冰冻切片，复温30分钟，简单洗一下，多聚甲醛固定30分钟，洗三次是（手洗加摇床分别三次），甘氨酸30分钟，抗原修复8分钟，洗三次，画圈A液30分钟，洗三次，通透30分钟，洗三次，封闭5%BSA37℃1-2小时，一抗4℃过夜，洗三次，二抗37℃1小时，洗三次，DAPI,B液封片。我的两个一抗混和流程是这种，到不知道，两个一抗分开应该怎么弄？求解，在这过程我很容易脱片，脱片率超过一般，可能是因为20u太厚了，但也不至于吧。