可尔必思
前段时间从原代小鼠体内提取了AM和BMDM做免疫细胞染色,测的F4/80和cd11b结果发现F4/80和cd11b均有荧光产生…按理说AM里应该不会有cd11b的莫非养的都是肺间质巨噬细胞?(IM)
也做了阴性对照组发现并没有特异性结合产生…搞不懂了有大佬能帮忙指点一下么图1.2是AM 图3.4时BMDM
感谢
晓雨知春来
考虑是AM提取过程中有少量肺间质巨噬细胞混入,建议优化AM提取方法提高纯度。
汤姆卜丽波
可能是提取的过程中存在细胞污染,你下次再提取的之后建议用瑞氏-姬姆萨染色法和Diff-Quik染色法鉴定AM的纯度
loveliufudan
根据图像,有以下分析:
1. F4/80主要标记组织激活的巨噬细胞,AM和BMDM都应该表达F4/80。
2. CD11b主要标记单核细胞和肺泡巨噬细胞,AM理论上不表达CD11b。
3. 从图片看,AM组CD11b染色呈阳性,说明AM中可能混杂了少量CD11b阳性细胞。
4. BMDM组F4/80和CD11b均呈阳性,与理论一致。
5. 考虑可能原因:
(1) AM提取过程中有少量肺间质巨噬细胞混入
(2) AM在体外培养过程中活化,表达了CD11b
(3) 抗体存在非特异性反应
6. 建议:
(1) 优化AM提取方法,提高纯度
(2) 更换CD11b抗体,确定是否为非特异性反应
(3) 加入CD11c等标记区分AM和间质巨噬细胞
7. 整体来说,AM中存在CD11b阳性可能是提取过程引入少量混杂或非特异性造成。需要优化方法提高AM纯度和鉴定效果。
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