简介
巨噬细胞是体内重要的天然免疫细胞,体外检测其功能并不能完全反映其体内行为,而检测某些药物的实际效应,又往往需要体内测定巨噬细胞活性。以细菌内毒素 LPS 活化巨噬细胞为例,LPS 是一种脂类和多糖的复合物,是革兰阴性菌细胞壁的主要成分,是内毒素和重要群特异性抗原。LPS 通过诱导单核-吞噬细胞系统的活化,大量释放 TNFα、IL-6 等多种促炎症细胞因子导致脓毒症、脓毒症休克,甚至死亡的发生。TLR4 是单核-吞噬细胞系统识别 LPS 的主要模式识别受体。
原理
体内活化巨噬细胞的基本原理是 LPS 是一种脂类和多糖的复合物,是革兰阴性菌细胞壁的主要成分,是内毒素和重要群特异性抗原。LPS 通过诱导单核-吞噬细胞系统的活化,大量释放 TNFα、IL-6 等多种促炎症细胞因子导致脓毒症、脓毒症休克,甚至死亡的发生。TLR4 是单核-吞噬细胞系统识别 LPS 的主要模式识别受体。
材料与仪器
动物:
6~8 周龄昆明小鼠
试剂:
生理盐水,2 μg LPS(溶于 1 ml NaCl)
仪器:
注射器
步骤
体内活化巨噬细胞的基本过程可分为以下几步:
(1)将小鼠随机分为 2 组,分别给小鼠腹腔注射 1 ml 生理盐水和 1 ml LPS 溶液,12 小时后,小鼠脱颈椎处死,分别回收腹腔巨噬细胞和腹腔液。
(2)Griess 法检测腹腔液 NO 水平;ELISA 法测定腹腔液 TNF-α。
(3)采用贴壁法培养腹腔巨噬细胞,同时在培养液中加入荧光微球,37 ℃ 培养 1~2 小时,利用流式细胞术观察巨噬细胞吞噬能力。
(4)可以同时分析 IL-12、IL-10、iNOS 及 Arg-1 等鉴定其活化类型,每个实验至少重复 3 次。
来源:丁香实验