求助！求一个RAW264.7巨噬细胞极化CD86和CD206流式protocol

以下是CD86和CD206流式细胞分析的基本流程和protocol：

CD86和CD206的流式细胞分析基本流程：

1.制备单细胞悬液

2.细胞表面标记抗体染色

3.流式细胞分析仪分析

CD86的流式细胞分析protocol：

1.用PBS洗涤细胞，离心收集；

2.用离心管离心收集细胞，弃去上清液，细胞用0.5mLPBS重悬；

3.加入0.5μL CD86-FITC标记抗体，室温孵育30min；

4.再次用PBS洗涤，离心收集；

5.最后重悬细胞，用流式细胞分析仪检测CD86标记的细胞。

CD206的流式细胞分析protocol：

1.用PBS洗涤细胞，离心收集；

2.用离心管离心收集细胞，弃去上清液，细胞用0.5mL 4℃ 0.1% Triton X-100/PBS破膜，室温放置10min；

3.加入1.5mLPBS，离心收集细胞；

4.用0.5mL 1%BSA/PBS溶液重悬细胞，室温孵育30min，然后加入CD206-PE标记抗体，室温孵育30min；

5.最后用PBS洗涤，离心收集细胞，重悬细胞，用流式细胞分析仪检测CD206标记的细胞。

需要注意的是，CD206是一种跨膜蛋白，因此需要破膜才能进行染色。常用的破膜方法有两种：化学破膜和机械破膜。在本protocol中，使用的是化学破膜，即用0.1% Triton X-100/PBS溶液破膜。

同时，破膜需要注意时间的控制，破膜时间过长或过短都会对实验结果产生影响。如果需要更准确的破膜时间，请参考试剂盒说明书或文献资料。

最后提醒的是，具体实验操作还需要根据自己的实验条件进行优化，以上protocol仅供参考。

流式protocol你可以找生物公司要一份或者自己到网站上下载一个就可以了。

CD206建议最好破膜测定。

CD206属于跨膜蛋白，抗体结合位点在胞内，所以做的时候一定要破膜。

需要破膜，买专门的破膜试剂盒做。