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求助!求一个RAW264.7巨噬细胞极化CD86和CD206流式protocol

相关实验:体内活化巨噬细胞

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云舒666

最近在做需要做流式,实验室目前没有人做过,需要一个protocol,同时想问一下做CD206是不是需要破膜啊,破膜需要专门买试剂盒吗

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4 个回答

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loveliufudan

有帮助

以下是CD86和CD206流式细胞分析的基本流程和protocol:

CD86和CD206的流式细胞分析基本流程:

1.制备单细胞悬液

2.细胞表面标记抗体染色

3.流式细胞分析仪分析

CD86的流式细胞分析protocol:

1.用PBS洗涤细胞,离心收集;

2.用离心管离心收集细胞,弃去上清液,细胞用0.5mLPBS重悬;

3.加入0.5μL CD86-FITC标记抗体,室温孵育30min;

4.再次用PBS洗涤,离心收集;

5.最后重悬细胞,用流式细胞分析仪检测CD86标记的细胞。

CD206的流式细胞分析protocol:

1.用PBS洗涤细胞,离心收集;

2.用离心管离心收集细胞,弃去上清液,细胞用0.5mL 4℃ 0.1% Triton X-100/PBS破膜,室温放置10min;

3.加入1.5mLPBS,离心收集细胞;

4.用0.5mL 1%BSA/PBS溶液重悬细胞,室温孵育30min,然后加入CD206-PE标记抗体,室温孵育30min;

5.最后用PBS洗涤,离心收集细胞,重悬细胞,用流式细胞分析仪检测CD206标记的细胞。

需要注意的是,CD206是一种跨膜蛋白,因此需要破膜才能进行染色。常用的破膜方法有两种:化学破膜和机械破膜。在本protocol中,使用的是化学破膜,即用0.1% Triton X-100/PBS溶液破膜。

同时,破膜需要注意时间的控制,破膜时间过长或过短都会对实验结果产生影响。如果需要更准确的破膜时间,请参考试剂盒说明书或文献资料。

最后提醒的是,具体实验操作还需要根据自己的实验条件进行优化,以上protocol仅供参考。

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huarenqiang5

有帮助

流式protocol你可以找生物公司要一份或者自己到网站上下载一个就可以了。

CD206建议最好破膜测定。

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sswei

有帮助

CD206属于跨膜蛋白,抗体结合位点在胞内,所以做的时候一定要破膜。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

需要破膜,买专门的破膜试剂盒做。

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